研究背景
艾塞那肽( Exenatide ) 是首个化学全合成的肠促胰岛素类似物，是由39个氨基酸组成的多肽（分子量：4186.63），具有促进葡萄糖依赖的胰岛素分泌，恢复第一时相胰岛素分泌，抑制胰高血糖素的分泌，减慢胃内容物的排空，降低食欲，减少食物的摄入，改善胰腺β细胞功能等作用，可降低2型糖尿病患者的空腹和餐后血糖，从而改善血糖控制。
艾塞那肽注射液主要通过皮下给药方式进行给药，给药后血浆中艾塞那肽的血药浓度很低，平均最高血药浓度仅为211pg/mL。
检测难点
在用质谱法进行生物基质中艾塞那肽检测时，艾塞那肽存在响应低和血浆基质干扰大的难题，检测方法灵敏度难以达到理想水平。据文献报道，采用MRM法检测血浆中艾塞那肽的最低定量限水平在ppb水平。
为提高检测灵敏度，之前检测血浆中艾塞那肽样品，前处理方法主要采用固相萃取（SPE）法进行样品的纯化和浓缩。但是SPE处理方法操作复杂，重现性差，每一次样品制备需要消耗大量昂贵的SPE小柱。
TSQ Endura在血浆样品中多肽药物检测的优势
TSQ Endura三重四极杆仪采用主动离子管控AIM技术（Active Ion Management），重新设计了离子源到检测器的离子光学传输系统，系统优化了质谱从离子源到质量分析器的全部电场设计，获得了突破性的性能提升。整个质谱系统具有高灵敏度，强抗噪音能力和耐用性，以及极佳的易用性，对复杂血浆基质中检测浓度极低的样品也能保持良好的检测性能。
▲ 图1 TSQEndura三重四极杆质谱仪内部结构示意图
本实验采用简单的有机溶剂沉淀法处理艾塞那肽血浆样品，对TSQ Endura的检测性能进行考察（该血浆样品处理方法没有除去更多的小分子干扰物质和没有浓缩药物）。
采用TSQ Endura质谱仪检测艾塞那肽血浆样品，最低定量下限可达100ppt，低浓度点样品基质干扰少，噪音水平低，信噪比高，完全满足定量要求；建立的血浆样品处理方法，操作简便，能够保证方法的重现性。
1.1 LC-MS/MS检测定量限考察
采用大鼠空白血浆样品配制艾塞那肽血浆样品，LC-MS/MS法考察生物样品中艾塞那肽的定量限。实验结果显示，艾塞那肽在血浆中有较高的响应和良好的信噪比，0.1ng/mL血浆样品中艾塞那肽的信噪比达300（S/N＞10），满足法规对于定量下限的要求，并且在目标物色谱峰附近基本无基质干扰（见图2）。
▲ 图2 0.1ng/mL艾塞那肽血浆样品定量限
1.2 线性范围与重现性考察
采用大鼠空白血浆将艾塞那肽标准溶液逐级稀释成浓度为1000、500、100、50、20、10、 5、2、1、0.5和0.1 ng/mL系列浓度血浆样品，加入1.5倍乙腈混匀后离心分别上样分析，以峰面积响应与浓度作标准曲线，考察方法的线性范围与线性相关性。结果表明线性关系良好，线性范围宽，为0.1-1000ng/mL（见图3），从而能够解决生物样品分析时药物浓度差异大的问题。同时，该法重现性好，配制 0.3ng/mL的艾塞那肽血浆样品，连续进样 5次，峰面积RSD为4.81%。
▲ 图3 艾塞那肽血浆样品标准曲线
小结
采用TSQ Endura三重四极杆质谱，建立了复杂血浆基质样品中多肽类药物艾塞那肽的检测方法。该法前处理简单，并具有灵敏度高，线性范围宽，重现性好等优点。
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