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生物样本中多肽类药物的方法开发

沃特世技术服务
2020.9.08



 1) 怎样是一个好的样品前处理方法?



    

  • 提供更好的分析物回收率

  • 大大降低非特异性吸附造成的损失

  • 显著提高样品浓度以满足检测限需求

  • 降低基质干扰

  • 从基质或酶解组分中选择性地分离出肽

  • 重现性好

  • 快速处理多个样本(高通量)

  • 方法开发简单易行,如果相同的方法适用于不同的肽则更好

  • 提升价值/成本回报


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肽类SPE筛选方案方法开发流程及优化方案

为了开发肽的通用方法,我们首先从小分子的方法开始。这是我们的2x4筛选方案,用于筛选所有4种混合模式吸附剂。如上图,您将看到我们的优化方法,其中我们针对肽调整了上样、清洗和洗脱溶剂。




 2) 肽提取方法开发的挑战有哪些?



    

  • 通常需要对样品进行浓缩(和蒸发挥干)以提高检测灵敏度;

  • 对洗脱溶液蒸发可能因肽的吸附而导致回收率降低;

  • 必须满足生物分析的通量要求。


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图:Oasis µElution Plates


Oasis µElution Plates — 为小体积肽提取赋能

无需挥干步骤即可将样品浓缩多达15倍

  • 无需蒸发挥干以达到所需的LODs

大幅减少蒸发过程中分析物的损失evaporation

  • 能安全地处理热不稳定的肽

  • 能减少因吸附于收集板而导致的肽损失

高通量样品制备

  • 96孔板处理时间 <30 min

  • 相当于<20 秒/样品




 3) 肽和蛋白质定量的色谱柱怎么选择?



    


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色谱柱选择的决策树

这里给大家介绍一个色谱柱选择的决策树。一般来说,我们从BEH C18开始,因为它对许多不同的肽都很适用。其次,我们发现,不管是治疗性的还是通过胰蛋白酶消化从蛋白质中释放出来的肽,在HSS T3都有很好的结果,因为HSS T3对极性比较大的肽具有更好的保留。CSH和CORTECS C18+是疏水肽的上佳选择。最后,对于较大的分子,我们推荐BEH C4柱。这四款色谱柱几乎能满足各种不同肽的检测需求。




 4) 如何在分析前将分析物的损失显著降低?



    

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新!QuanRecovery样品瓶及样品板

采用MaxPeak高性能表面(HPS)技术,解决蛋白/多肽在样品制备阶段的非特异性吸附问题

  • 减少制备和储存阶段的样品损失

  • 提高灵敏度与重现性

更加兼容质谱分析

  • 样品瓶/板均兼容自动进样器

  • 锥底设计减少残留体积


本周我们主要分享了怎么做生物样本中多肽的方法开发及一些注意事项,下周我们会在同一时间和大家一起探讨一下多肽类药物分析中故障排查的思路,如果您感兴趣的话,请持续关注我们啊!
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