1) 怎样是一个好的样品前处理方法?
提供更好的分析物回收率
大大降低非特异性吸附造成的损失
显著提高样品浓度以满足检测限需求
降低基质干扰
从基质或酶解组分中选择性地分离出肽
重现性好
快速处理多个样本(高通量)
方法开发简单易行,如果相同的方法适用于不同的肽则更好
提升价值/成本回报
肽类SPE筛选方案方法开发流程及优化方案
为了开发肽的通用方法,我们首先从小分子的方法开始。这是我们的2x4筛选方案,用于筛选所有4种混合模式吸附剂。如上图,您将看到我们的优化方法,其中我们针对肽调整了上样、清洗和洗脱溶剂。
2) 肽提取方法开发的挑战有哪些?
通常需要对样品进行浓缩(和蒸发挥干)以提高检测灵敏度;
对洗脱溶液蒸发可能因肽的吸附而导致回收率降低;
必须满足生物分析的通量要求。
图:Oasis µElution Plates
Oasis µElution Plates — 为小体积肽提取赋能
无需挥干步骤即可将样品浓缩多达15倍
大幅减少蒸发过程中分析物的损失evaporation
能安全地处理热不稳定的肽
高通量样品制备
96孔板处理时间 <30 min
相当于<20 秒/样品
3) 肽和蛋白质定量的色谱柱怎么选择?
色谱柱选择的决策树
这里给大家介绍一个色谱柱选择的决策树。一般来说,我们从BEH C18开始,因为它对许多不同的肽都很适用。其次,我们发现,不管是治疗性的还是通过胰蛋白酶消化从蛋白质中释放出来的肽,在HSS T3都有很好的结果,因为HSS T3对极性比较大的肽具有更好的保留。CSH和CORTECS C18+是疏水肽的上佳选择。最后,对于较大的分子,我们推荐BEH C4柱。这四款色谱柱几乎能满足各种不同肽的检测需求。
4) 如何在分析前将分析物的损失显著降低?
新!QuanRecovery样品瓶及样品板
采用MaxPeak高性能表面(HPS)技术,解决蛋白/多肽在样品制备阶段的非特异性吸附问题
减少制备和储存阶段的样品损失
更加兼容质谱分析
样品瓶/板均兼容自动进样器
锥底设计减少残留体积