使用CE-SDS方法进行
腺相关病毒（AVV）衣壳蛋白分析
基因治疗作为一种新的治疗手段，已经进入临床阶段，目前在世界范围内都获得了较大的关注。其中重要的一个环节是需要将目的基因导入人体，进行治疗作用。在引入人体中关注度最多的方法是使用载体进行运载。
腺相关病毒（AAV），由于其安全性好、宿主细胞范围广、免疫源性低、在体内表达外源基因时间长等特点，被视为最有前途的基因转移载体之一，在基因治疗和疫苗研究中得到广泛应用。
为了保证AAV相关产品的安全性和质量，需要研究人员对AAV衣壳蛋白进行纯度分析。但是AAV载体在早期开发过程中，蛋白量很少，只有几微克或者更少，给研究人员的分析带来了挑战。
传统的检测方法包括银染或Sypro红宝石染的SDS -PAGE方法，虽然灵敏度高，但是操作复杂、耗时耗力。科学家们基于毛细管电泳的方法，开发了替代SDS -PAGE的CE-SDS方法，其具有分辨率高、定量准确、重现性好、自动化程度高、速度快等优点。
图1. CE-SDS 分离模式图
SCIEX利用其多年累积的技术优势，基于毛细管电泳开发了针对腺相关病毒（AAV）衣壳的方法。
该方法主要优势：
简单明了的样品制备程序
VP1, VP2, VP3分辨率极
病毒蛋白的CPA%(校正峰面积%)的RSD小于0.7%
样品浓度与吸光度的线性关系良好，R² =0.9991
01
实验条件
实验基于SCIEX PA 800 Plus药物分析系统（配备PDA检测器）和32Karat 软件。使用试剂为商业化的SDS-MW试剂盒。
02
实验结果
图2. 连续注射1X10¹³GC/mL AAV8样品
图3. 连续注射0.5X10¹³GC/mL AAV2样品
图2和图3使用不同浓度AAV2和AAV8样品进行连续注射研究，均显示了较好的峰面积的重复性。
通过评估AAV2和AAV8三种病毒蛋白在不同滴度和使用不同预处理方法下校正峰面积的RSD% (CPA%)，证明了该方法的优良重复性。计算是基于每个样品溶液连续8次注射。CPA%的RSD%均小于0.7%。
图4. 对AAV 8样品浓度(10¹³ GC/mL)的吸光度响应值(mAU)呈线性
该方法通过绘制VP3对样品滴度的吸光度响应，证明了从5X1011GC/mL到1x1014GC/mL AAV8样品的良好线性度。R2是0.9991。
03
总结
本文提供了一种腺相关病毒分析的新思路：
使用CE-SDS方法来评估腺相关病毒(AAV)病毒衣壳的纯度；
样品制备方法简单、直接，对浓度较低、数量有限的AAV样品具有较高的灵敏度；
该方法对不同的病毒蛋白具有很好的分辨能力，重复性好。
本文摘录自SCIEX技术文章<Purity Analysis of Adeno-Associated Virus (AAV) Capsid Proteins using CE-SDS Method>，如需了解更多内容，可以发送邮件至wentao.ma@sciex.com索取，感谢您的关注和支持！
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