抗体-药物偶联物 (ADC) 是通过偶联臂使抗体和药物相结合，可杀死或抑制癌细胞等特定细胞的抗体药物。至今为止，共有8种ADC药物被美国食品药品监督管理局批准。然而使用现有的ADC合成方法，药物会在一定概率下结合于抗体的多个部位，从而产生药效和毒性各不相同的ADC的异构体。因此，只需要对药效高、毒性低的ADC成分进行纯化1)。
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AJICAP™ ADC偶联技术
最近，有研究报告提出了一种新的ADC合成方法，该技术 (AJICAP™) 可使药物只结合于抗体Fc段的特定位置2,3)，从而得到每1个分子抗体的药物/抗体比 (DAR) 是1或2的位点特异性ADC。研究人员还在报告中指出，对于使用该技术合成的ADC，通过疏水层析 (HIC) 对其进行纯化，能够进一步分离DAR=1和DAR=2。
在一篇近期发表的关于AJICAP技术的论文 (出自开放获取期刊Open Access) 中，使用了3种疏水填料TOYOPEARL Phenyl-650S、Butyl-650M和PPG-600M对位点特异性ADC进行了分离研究。
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位点特异性ADC的疏水纯化策略
（图片来源于Y. Matsuda et al., Antibodies, 2020, 9, 16）
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疏水填料Phenyl-650S纯化位点特异性ADC的分离实例
上样缓冲液使用吸附力相对较弱的NaCl盐溶液，而洗脱缓冲液则使用了含有20%异丙醇的溶液。结果表明，TOYOPEARL Phenyl-650S表现出最好的分离效果。未反应抗体 (DAR=0) 不被吸附，直接流穿。之后可以通过梯度洗脱分离DAR=1和DAR=2的ADC。同时，还提高了ADC的回收率。
根据抗体和药物的特性、导入数量等条件，ADC的疏水性会有较大不同。因此，根据ADC选用不同疏水性的HIC填料以及合适的缓冲液体系，是非常重要的。
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如何选择合适的疏水填料？
东曹提供以下5种具有不同疏水性和选择性的HIC填料。TOYOPEARL HIC填料的疏水性由弱到强的顺序为：乙醚(Ether)、聚丙二醇(PPG)、苯基(Phenyl)、丁基(Butyl)、己基(Hexyl)。
参考文献：
1) K. Yamada et al., Angew. Chem. Int. Ed. 2019, 58, 5592-5597, DOI:10.1002/anie.201814215
2) Y. Matsuda et al., Anal. Chem. 2019, 91, 12724-12732, DOI:10.1021/acs.analchem.9b02192
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