作者：David L. Wong，Tanner Stevenson，Jing Chen
一种生成具有极低副作用的有效生物治疗药物的全新方法是使用抗体药物偶联物 (ADC)。ADC 代表了新一代的靶向生物治疗药物，成为药物开发中一个快速增长的领域。其合成方法是将高效细胞毒性药物通过连接物连接至靶向特定细胞的单克隆抗体 (mAb)。ADC 将这些药物直接送达目标组织，同时限制药物在非目标组织中的毒性。
虽然 ADC 药物的概念比较简单，但是全面表征 ADC 的分析工作通常十分复杂。本文介绍了一种简单易用、充分整合的方法，可用于测定 ADC 的药物/抗体比率 (DAR)。该方法采用了 Agilent AssayMAP Bravo 平台、MassHunter Walkup 软件以及 MassHunter BioConfirm DAR 计算器。
复杂化学物质需要功能强大的一体化分析工作流程
ADC 具有高效、高选择性和低毒性的特点，其生产与表征比传统单克隆抗体所采用的过程更为复杂。例如，每个抗体所连接的药物分子数量相差极大，具体取决于偶联化学方法和反应条件。取得适合的药物/抗体比率 (DAR) 平均值对于 ADC 效率优化和毒性最小化至关重要。需要采用严格质量控制以确保 ADC 具有恒定的 DAR，这通常采用液相质谱与质谱联用 (LC/MS) 进行测定。
为了降低用于 DAR 计算的液质联用分析结果的复杂性，通常在分析前离线完成还原和去糖基化。该样品前处理过程通常需要耗费大量人力，也就限制了通量并会引入变异性。此外，开发和分析 ADC 的科学家通常不是液质联用分析领域的专家。为了克服这些困难，安捷伦开发出了一套一体化工作流程（图 1）用于 ADC 药物的 DAR 测定，该工程流程可自动进行样品前处理和 DAR 计算，同时帮助非液质联用系统专家的操作人员获取高质量的结果。
图 1. 一体化的 MassHunter Walkup ADC 计算工作流程包括自动计算 DAR 和交付邮件报告。
此工作流程有助于非专家级用户获得专家级分析结果
Agilent AssayMAP Bravo 是一个自动化样品前处理平台，其用户界面十分简洁，有助于非自动化专家的科学家在液质联用分析前，对 ADC 进行高效纯化、还原和去糖基化。自动化样品前处理可使 ADC DAR 工作流程中最主要的数据变异性降至最低。
Agilent MassHunter Walkup 软件（图 2）使用户能够十分轻松地操作液质联用仪器对其处理后的样品进行分析，只需输入最少的样品信息，选择合适的 ADC 分析方法，将样品置于系统相应位置，即可进行无人值守式分析流程。用户无需掌握如何针对应用设置或优化液质联用系统。
图 2. Agilent MassHunter Walkup 软件采用简洁的用户界面，有助于非液质联用系统专家的用户轻松运行样品并获取 DAR 结果。
完成液质联用分析后，MassHunter BioConfirm DAR 计算器软件将自动计算 DAR 值，然后将其写入分析结果报告并将报告以邮件形式发送给分析人员。
自动样品前处理与人工样品前处理所得的药物/抗体比率几乎相同
采用了一份赖氨酸偶联 ADC 样品，目的是比较自动的一体化工作流程与采用人工样品前处理的同类工作流程之间的性能差异。每种类型的工作流程中采用了四种不同的样品前处理条件：
完整糖基化 ADC
还原态糖基化 ADC
完整去糖基化 ADC
还原态去糖基化 ADC
然后采用 BioConfirm DAR 计算器分析解卷积质谱图。图 3 展示了代表性分析结果。
图 4 展示了 MassHunter BioConfirm 中自动化 DAR 计算器所得的关于还原态糖基化 ADC 的代表性报告。
图 3. 完整糖基化和去糖基化 ADC 的代表性 DAR 计算结果，样品由 AssayMAP Bravo 平台制得。
图 4. 安捷伦 DAR 计算器得出的还原态糖基化 ADC 的代表性报告。
采用相同的 ADC 样品进行了相同的实验，不同的是采用人工样品前处理替代 Agilent AssayMAP Bravo 平台。如预期结果一样，采用人工样品前处理和自动样品前处理所得的 DAR 值几乎相同。
只需极少的精力和专业知识即可获得可靠的 DAR 结果
开发抗体偶联生物治疗药物的科学家必须获取准确可靠的 DAR 信息 - 这与他们在样品前处理、质谱仪操作、数据解读或人工计算 DAR 方面的专业知识无关。安捷伦提供有一个一体化工作流程，可通过邮件直接给科学家发送可靠的 DAR 值，而只需极少的人工输入操作。
该一体化工作流程采用 Agilent AssayMAP Bravo 平台、安捷伦质谱仪与 MassHunter Walkup 软件，以及 MassHunter BioConfirm DAR 计算器为您提供可靠的分析结果。
如需了解更多信息，请下载关于该工作流程的完整应用简报 5991-7366EN。然后仔细阅读可加快 ADC DAR 表征的安捷伦生物制药工作流程解决方案。
仅限研究使用。不可用于诊断目的。
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