01
背景介绍
在世界范围内,桔青霉素(Citrinin,CIT)是最常见的青霉属(Penicillium)和曲霉属(Aspergillus)某些菌株产生的一种霉菌毒素,主要污染小麦、裸麦、大麦和燕麦等农作物。
CIT含1个羧基,有离子态和非离子态(羧基和相邻的酮基及羟基形成分子内氢键) 2种形式(图1)。
CIT作为一种抗菌素,具有杀死革兰氏阳性细菌的能力,以及抗真菌和抗原虫等功效。
但是,同时CIT对哺乳动物也具有肾脏毒性。
此外,CIT还经常伴随着肾毒素—赫曲霉毒素一同污染水果、肉类和奶酪等食品。
两种或多种霉菌毒素加起来的毒性比任何单一毒素的毒性都大。
红曲霉可产生红曲色素(Monascus pigments,Mps)和抑菌素等多种次级代谢产物,具有降血压、降血糖和降低胆固醇等功效,但部分红曲菌产生的CIT引起了人们对红曲产品安全性的关注。
CIT会污染红曲色素及红曲产品,如霉、酱、红曲米、功能性红曲、酿酒用曲等。
近年来的调查研究发现,CIT对大鼠经口LD50为50 mg/kg;小鼠为112 mg/kg。
有文献报道表明,将CIT污染的米喂大鼠,动物生长缓慢,并且出现肾脏功能和形态改变,排尿量增加。
通过病理学检查可见肾脏明显增大,呈灰白色,肾脏重量为对照组的一倍半。
2017年10月27日,世界卫生组织国际癌症研究机构公布的致癌物清单中CIT在3类致癌物清单中。
2019年11月14日,据欧盟官方公报消息,欧盟委员会发布(EU)2019/1901号条例,修订以红曲霉发酵的大米基食品补充剂中CIT的最高限量为100 μg/kg。
图1 CIT结构
本实验参照国家标准《GB 5009.222-2016 食品安全国家标准 食品中桔青霉素的测定》和《QB/T 2847-2007 功能性红曲米》,采用免疫亲和柱-高效液相色谱-荧光法(HPLC-FLD)检测了红曲米中CIT的含量,助力红曲米质量控制。
02
样品制备
参照《GB 5009.222-2016 食品安全国家标准 食品中桔青霉素的测定》中CIT前处理和测试方法。
仪器:
通微EasySep® 3030二元梯度高效液相色谱仪
色谱柱:
通微 C18柱(4.6×250 mm,5 μm)
流动相:
乙腈︰10 mmol/L磷酸水溶液=60︰40
流速:
0.8 mL/min
检测波长:
激发波长274 nm;
发射波长440 nm
柱温:
35 ℃
进样量:
20 μL
03
测试结果
方法检出限:5.0 μg/kg;方法定量限:20.0 μg/kg
线性范围:1.0~20.0 ng/mL
相关系数: r2=0.9998
图2 CIT标准色谱图
04结论
采用EasySep ® 3030液相色谱系统,配备荧光检测器,可以实现红曲米中CIT的检测,满足国家标准要求,方法准确、灵敏度高。
05
配置列表
推荐仪器配置
通微EasySep® 3030二元梯度高效液相色谱仪(配自动进样器、柱温箱和荧光检测器)
通微 C18柱(4.6×250 mm,5 μm)
通微Unimicro ChromStation色谱工作站
通微公司,于2002年成立于上海张江高科技园区,在国内拥有3家全资子公司,集分析仪器研发、制造、销售与服务为一体,在新型液相色谱仪器及检测器,特别是微流电动液相色谱相关领域取得了众多重大开创性成果。可为您提供包括微流电动液相色谱系统、毛细管电泳仪、液相色谱仪、蒸发光散射检测器、微型质谱仪和液相色谱柱在内的多种产品及服务。
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