先来看个小实验:
把一块黄油和一勺蔗糖分别放入水中,我们会发现,黄油很难溶解,而蔗糖很快溶解。这就是常说的“相似相溶”。
极性分子蔗糖与极性的水分子作用力强,因此,蔗糖很容易溶解在水中。
而黄油是由许多非极性分子组成的,更易溶于非极性溶剂中。
了解了相似相溶原理,接下来我们来看液相色谱的分类。
液相色谱有很多种类,其中正相色谱是最先被发明出来的,它的特点是色谱柱里固定相极性大于流动相的极性。
在正相色谱中,流动相是弱极性的,比如正己烷,石油醚等。
而固定相是有极性的,比如布满硅羟基的硅胶。
这些极性的硅羟基就像赛道两边的小手,和进入色谱柱的化合物发生相互作用。
根据相似相溶原理,极性大的化合物和小手的作用更强,出峰就会慢一些。
极性弱的化合物与硅羟基彼此不感兴趣,出峰就会快一些。
在化学家掌握了硅胶的化学键合技术之后,反相色谱得到了很大的发展。
正如其名,反相色谱就是和正相色谱反过来。
它的流动相是强极性的,比如甲醇/水。
而固定相是弱极性的,比如十八烷基键合硅胶柱,也叫C18柱,就是把硅胶上原本的硅羟基变成了一条碳十八的长链。
这样一来硅胶表面就从强极性变成了弱极性。
虽然正相色谱是先发明的,但使用并不普遍。现在,反相色谱的应用占到了所有液相应用的80%以上。
这是为什么呢?
一来,反相色谱的流动相不再需要烃类、氯仿这些更危险的有机溶剂,使用起来更加简单和安全。
二来,我们上一集讲过,液相和气相是互相补充的技术。极性弱,沸点低的化合物优先用气相分析。
而极性强的化合物由于分子间作用力更强,往往沸点不低,不适合用气相分析,更适合用反相液相色谱分析。
另外,反相色谱的流动相有更多的参数选择,比如pH、缓冲盐的种类和浓度等,能更好地调整分离效果,而正相色谱可调整的流动相参数非常有限。
此外,还有一些化合物,既不适合用正相分析,也不适合用反相分析,比如糖类。
因为糖类有很多羟基,极性很强。
若用反相分析,糖和C18没有相互作用,出峰太快,无法分离。
若用正相分析,糖类又不能溶解在正己烷这种非极性的流动相里,也无法分离。
这种情况,我们可以尝试使用亲水作用色谱,HILIC模式。
近几年关于LCMS的HILIC应用研究非常热门,它使用类似于正相的色谱柱,比如硅胶,和传统反相的流动相,比如乙腈/水。
这样的组合即能够溶解样品,又能够保留样品,最终使样品得到很好的分离。
如果化合物的极性特别强,一言不合就电离。
还可以选择离子对色谱,或者离子交换色谱,来增强离子和固定相的相互作用,使不同的化合物得到分离。
不管是正相、反相还是离子交换色谱,化合物出峰的情况都是和极性相关的,而凝胶色谱的出峰却只和化合物的大小有关,所以也叫体积排阻色谱。
当样品流经凝胶色谱柱时,直径较大的化合物,不易进入凝胶颗粒的微孔中,所以很快出峰。
而直径较小的化合物会进入凝胶颗粒的微孔中,并不断的进出和扩散,因此,较晚出峰。
总结一下,这一期我们给大家介绍了正相色谱、反相色谱、亲水作用色谱、离子对色谱还有凝胶色谱。
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