1. 介绍
目前，因微孔板和深孔板具有可以同时培养多种培养物，节省筛选的时间和成本的优点。将其用于细胞培养、细菌、酵母菌和真菌培养的意义越来越大。
与静态培养相比，使用摇床会产生更好的培养效果。摇床可以提供高质量的温度分布，而湿度只能达到 85%。这可能导致微孔板中培养液的蒸发损失和污染。这些问题是否会发生，取决于实验条件：如果使用 2 mL 的深孔板，覆盖有透气膜并孵育过夜，通常并没有很大的损失。而 96 孔板中的液体少，可能需要额外的保护才能得到令人满意的实验结果。
2. 实验条件
实验均使用带有直接蒸汽加湿功能的 Multitron (INFORS HT)进行。实验条件如下：温度：37°C、转速：250 rpm、湿度：85%，并且在保湿盒的顶盖上装有特氟龙滤膜。
为证明保湿盒的顶盖中滤膜的气体传输能力，使用了 CO2 气体。将酶标板保湿盒放在 Multitron 内，CO2 浓度设置为 5%，微孔板的盒子用氮气充气以防止 CO2进入。然后，停止供应氮气并测量培养室和箱中的 CO2浓度。
培养物：大肠杆菌，大肠杆菌细胞浓度以湿重表示。
使用的微孔板是：Costar 3799，96 孔，圆底带盖，无热原，聚苯乙烯。每孔分别加入 150 µL 水和培养基。透气膜：BrandTech 密封透气膜。
图 1：酶标板保湿盒
3. 气体传输能力
下图表明，保湿盒子内 CO2 浓度在大约 10 min 内达到 4%，在大约 30 min 内达到 5%，这表明细胞和微生物培养的气体可以充足地传输到保湿盒。而滤膜类型之间或有/无振动之间没有显著差异。
然而，从保湿盒顶盖上取下滤膜会加快气体传输：大约 4 min 内 CO2 浓度达到 5%。
图 2：CO2 在不同类型保湿盒中的浓度累积图
关闭摇床箱门后，记录摇床内和保湿盒内的湿度（图 3）。比较表明，箱内的湿度跟随箱内的湿度存在约 5% 的偏差。在 15 min 内在摇床腔体内和保湿盒内达到饱和度。
图 3：摇床腔体内和保湿盒内湿度的增加图（盖子上带有特氟龙滤膜）
4. 蒸发
a) 主动加湿
蒸发数据分析表明，主动增加 85% 的湿度，蒸发量小，24 h 内平均约为 0.6%（图 4），因此该值可忽略不计。而在 65% 的相对湿度下，蒸发率在 24 h 内上升到 3.6%。
图 4：在 85% 和 65% 相对湿度下96 孔板中每 24 小时的平均蒸发百分比(每孔 150 µL)
对于易污染的培养物，例如细胞培养，建议使用顶盖中的气体滤膜，并在需要时提供严格无菌的孵育环境。如果盒子定期高压灭菌，建议在每次高压灭菌之前放置一个新的纸滤膜。
然而，对于大多数培养，气体滤膜的使用并不是必要的。带有孔的顶盖会提供足够的保护，减少蒸发并防止污染。移除气体滤膜后，气体传输速度比使用气体滤膜快 10 倍。因此，建议使用不带气体滤膜的保湿盒进行微生物的高密度培养。
b) 不主动加湿
在酶标板保湿盒内孵育 96孔板，但不主动加湿，将在 24 h 内造成 6% 到 12% 的蒸发损失，具体取决于微孔板的品牌：
微孔板品牌
TPP
No name
24h 蒸发损失
5.9%
11.4%
（Data from Infors AG, Dr. D. Bruecher）。
作为被动加湿的一种方式，可以将一层（= 6 片）装满水的开放式 6 孔板置于保湿盒中。这导致蒸发损失减少 50%。
微孔板品牌
TPP
No name
被动加湿 24 h 蒸发损失
2.6%
5.0%
（Data from Infors AG, Dr. D. Bruecher）。
5. 96孔板中微生物的生长
96 孔板中大肠杆菌在微孔板盒内培养的比较表明，无论微孔板是未覆盖、用塑料盖盖住还是用透气膜盖住，生长都没有差异（图 5）。
图 5：6 h 内大肠杆菌的生长曲线
图 6：带有透气膜的大肠杆菌 48 h 的生长曲线
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