图1. LNP的冷冻透射电镜图,a、b、c分别为粒径大小在48nm、64nm、100nm左右的LNP
随后采用小角中子散射技术来进一步研究LNP上的磷脂分子分布情况,利用氘化的DSPC和胆固醇进行LNP的制备,并分别在不同比例下的D2O/H2O缓冲液中检测其散射信号。结果如图2A,散射信号只在缓冲液中D2O较低时检测到,即在q ∼ 1 nm−1处有一明显的峰。而DSPC的散射长度密度(SLD)和其他磷脂材料有最大的区别,这些散射曲线都与之前报道过的核-壳结构体系的小角散射的结果相似,而且图中的数据拟合与一核两层壳的结构最为吻合。图2B中的散射长度密度数据则可代表LNP外壳到中心的距离,图2C则是根据散射结果分析后得到的LNP结构的模型示意图。在此模型中,我们认为LNP的核由阳离子磷脂、胆固醇、mRNA和水组成,在此核的外部是一层2.4 nm厚的由DSPC,少部分的阳离子磷脂、胆固醇以及PEG磷脂中的DMPE端组成的单层壳。再向外则是一层约4 nm厚的PEG磷脂壳。
图2. (A)不同D2O含量下的LNP小角中子散射结果,从上至下分别为18%、27%、50%、68%、100%的D2O。(B) SLD曲线作为LNP中心距离的函数,与A中数据的拟合相对应。(C) 根据SLD数据描绘的LNP中脂质分布示意图
VDLin-MC3-DMA · SLDDLin-MC3-DMA + VChol · SLDChol+ VH2O · SLDH2O +VRNA · SLDRNA =SLDcore
参考文献:
1. Zackrisson M, et al. (2005) Small-angle neutron scattering on a core-shell colloidal system: A contrast-variation study. Langmuir 21:10835–10845
2. Belliveau NM, et al. (2012) Microfluidic synthesis of highly potent limit-size lipid nanoparticles for in vivo delivery of siRNA. Mol Ther Nucleic Acids 1:e37.
3. Marianna YA, et al.(2018)Successful reprogramming of cellular protein production through mRNA delivered by functionalized lipid nanoparticles. PNAS 115: E3351–E3360
纳米药物制备系统
应用范围:
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NanoAssemblr制备的LNP实现对CRISPR-Cas9的高效递送