1.色谱检测参数
液相色谱仪: | 移去色谱柱(包括保护柱,鬼峰补集柱等),用内径为0.005英寸(≈0.13mm)的约1m的管线连接进样器和检测器。 |
检测器: | UV |
流动相A: | 纯化水 |
流动相B: | 0.1%的丙酮水溶液,即1ml丙酮加入1000ml纯化水中混匀即得。 |
样品溶液: | 0.1%的丙酮水溶液。 |
流速: | 1.0ml/mL |
波长: | 265nm |
柱温: | 25℃ |
进样体积: | 10μL |
时间(min) | 流动相A(%) | 流动相B(%) |
0 | 100 | 0 |
20 | 0 | 100 |
25 | 0 | 100 |
25.1 | 100 | 0 |
30 | 100 | 0 |
2.运行的色谱图(梯度曲线)如下:
tD=t1/2-0.5tG
(色谱图来自Thermo U3000)
3.滞留体积计算公式如下:
VD=tD*F0=(t1/2-0.5tG)*F0
式中:VD:滞留体积,mL;
tD:滞留时间,min;
F0:流速,1.0mL/min;
t1/2:检测器响应达到50%B时的时间,min;
tG:0%B-100%B梯度总时间,20min;
计算举例如下:
梯度基线起始0%B时检测器响应值为0mAU,梯度基线结束100%B时检测器响应值为200mAU,则梯度基线中间50%B时检测器响应值为100mAU,此时从梯度曲线上找到检测器响应值为100mAU时的时间即为t1/2(比如:10.851),然后带入滞留体积计算公式计算(VD)即可。
VD=tD*F0=(t1/2-0.5tG)*F0
=(10.851min-0.5*20min)*1.0mL/min =0.851mL
建议至少平行测试3针,计算VD的平均值和RSD%。
4.参考依据
现代液相色谱技术导论第3版第三章3.10小节。