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HPLC进样顺序

基泰生物
2022.8.24
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HPLC进样顺序
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凡是有关GMP的测试,都需要经过验证。这不只是方法本身,只要在执行方法过程中所有的步驺都要验证。譬如进样的顺序。不是我们坐在那里想象是啥就写出来,也不是别人说啥,我们就去做。完全看自己的方法本身来决定,绝对是有弹性,但是必须经过验证。验证后的程序就是以后我们分析样品的准则。只要在验证范围之内变动是允许的,否则必须重新局部性的验证。

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现在把一般的进样的顺序排列如下:


1. 空白(2针或更多,梯度2针,等度多针,做为平衡底线的取得)

2. 标准品1(6 针,系统适应性)

3. 标准品2(3 针)

4. 样品1-1 (3针)

5. 样品1-2(3 针)

6. 标准品1 (1 针)

7. 样品2-1 (3 针)

8. 样品2-2(3 针)

9. 标准品1 (1针)

10. 依此类推

11. 最后一定是标准品1


空白通常就是用溶解样品及标准品的流动相组成。当然有例外,但是必须验证。

标准品1 及2,是用来测试标准品制备的准确度。标准品1的最前6针是用来做为计算反应系数(Response Factor)来测试系统适应性。如果不符合规定,必须立即停止仪器运作。看看毛病在那里,修正后再重头开始。这点美国FDA是严格要求。在分析的进行中,如果发现有任何毛病,必须立即停止。绝对不能说等分析结束后再说。还有就是系统适应除了开头的六针之外,在往下的分析,要随时把标准品1的结果加入再计算。任何时间,有超标必须停止。(如果下班了,第二天上班后,需要立刻检验,然后把不符合系统适应性以后产生的数据,全部废弃。之前符合的,可以保留)。在分析的系列完成后,从头到尾所有的标准品1的数据,必须拿来计算样品的含量及系统适应性。如果超标,那么整个数据不能使用(这点和上面所说,除掉不符合的部分,没有冲突)。通常是有趋向逐渐超标,那整个数据就不能使用了。至于如何取舍,在验证当中应该是可以发现情况的。所以我一直在强调验证的重要性。在验证过程中,会有许多情况出现,可以提供日后分析的参考。


至于两个标准品之间,到底可以放多少样品,完全根据验证来决定。可以减少但是绝对不能增加。在梯度色谱,每针的时间会比较长。所以可以变通。譬如把系统性的6针拆开,不必一次完成。只有一个问题,就是要等到全部样品完成后,才能知道系统适应性是否通过。这就是我们要采取的冒险。每个样品要秤两次,就象标准品一样。每个样品要进3针。这是我在美国33年的做法。不管分析时间长短。如果我是审查员,我绝对如此要求。因为我一直这样做,所以经过这么多年来,从来没有一个官方人员,问过我为何如此做。这就表示是被接受的。如果,你不愿意,那么就要说明,为何你要使用你自己定的方法。譬如一个样品,进样两针,或者一个样品秤两次,每次一针。这个问题,不断有人提出。我也回答过,好象没有多大的反应。我就不再重复了。

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