东曹色谱产品在腺相关病毒 (AAV) 分离分析中的应用

腺相关病毒 (AAV) 作为安全性优异的瞬转性病毒载体而被熟知，已被广泛用于基因治疗药物的应用研究、开发中。在这些药物的研发和生产过程中，AAV的关键质量属性 (CQA) 分析、大规模培养的下游纯化工艺中，都需要使用色谱分离技术。

我们在此前的公众号推文中已经对病毒载体的分离纯化方法进行了阐述。本篇推送将具体介绍AAV分析、分离纯化时常用的色谱分离模式和洗脱条件，以及东曹TSKgel色谱柱/TOYOPEARL层析填料的应用实例和相关文献。

通常可使用尺寸排阻色谱 (SEC) 有效分析AAV的多聚体和杂质、阴离子交换色谱 (AEC) 对AAV颗粒中含有目标基因组的实心颗粒 (Full颗粒) 和不含目标基因组的空心颗粒 (Empty颗粒) 进行分析或分离纯化。此外，还可使用阳离子交换色谱 (CEC)、疏水色谱 (HIC) 和亲和色谱 (AFC) 等分离手段。下表汇总了AVV的色谱分离模式和常用洗脱液、分离条件。

▼ 分离AAV时常用的色谱分离模式

数据来源: P.Gagnon et al., Pharmaceutics,2021,13,113 (CC BY),

https://doi.org/10.3390/pharmaceutics13010113

在纯化病毒载体时，除了需要去除混入的DNA、蛋白质杂质外，病毒颗粒中还含有目标基因的Full颗粒以及不含基因的Empty颗粒。为了提高载体的效率，仅需要纯化Full颗粒。

下图是使用阴离子交换色谱柱TSKgel DNA-STAT分离AAV的Full颗粒和Empty颗粒的色谱图。图中Peak 2的区域中含有较多的Full颗粒。所有病毒颗粒中含目标基因颗粒的比例 (VG/CP) 从样品分离纯化前的21.0%提高至Peak 2区域中的73.1%。

最后，东曹色谱产品在AAV分析、分离纯化中应用的相关文献和技术资料，我们提供了链接供大家查阅，请点击“阅读原文”查看。

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