流式细胞术

流式细胞术（Flow cytometry，简称FCM）是一种基于流式细胞仪通过检测偶联荧光信号快速、准确、客观，并且同时检测单个微粒（通常是细胞或者颗粒）的多项特性技术，同时可以对特定群体进行分选。主要研究颗粒性物质，如大量的临床样本、外周血、骨髓、细胞穿刺液、洗脱液以及各种培养细胞、藻类、原生动物、病毒等生物性颗粒及人工合成微球等物理颗粒。

FCM的技术特点：

1.检测速度快；2.准确性好；3.精确度高；4.细胞不被破坏；

5.灵敏度高；6.可进行多参数检测；7.不单限于表面抗原，可根据发光度（如细胞体积）或荧光散射度（如DNA、RNA或蛋白含量、酶活性、特异抗原）来分离细胞。

流式细胞仪是流式细胞术的主要仪器，一般分为液流系统、光路系统、监测分析系统。

流体系统负责将样品从样品管转移到流动池。一旦通过流动池（并通过激光束），样品将被分选出来（在细胞分选仪中）或移到废液中。

光学系统的元件包括激发光源、透镜和滤光片（用于收集和移动仪器周围的光）以及用于产生光电流的检测系统。

电子系统是流式细胞仪的大脑。在这里，来自检测器的光电流经过数字化、处理和保存，以用于后续分析。 

目前品牌有BD,Beckman,Agilent,Thermo等。

此款BD流式细胞仪的配置如下：

分析速度 : 10,000个细胞/秒

检测细胞大小：0.5μm-50μm

激光规格 ：488nm激光器、633nm激光器

检测方式 ：石英杯流动池，与荧光物镜通过光胶偶连

光路引导系统：固定光路系统，激光和荧光传导采用全光纤化光路

荧光收集 ：八角形和三角形连续反射收集系统

荧光滤片 ：488nm激光

633nm激光：660/20nm、712/21nm、780/60nm

探测器配置：共8个探测器   

1.细胞群比例测定以及表型测定

运用流式细胞术测定某细胞群体或者细胞亚群的比例是其最基本功能。要完成细胞群比例测定我们需要明确：要测定的总体是什么，例如免疫细胞的特征表型是CD45,T细胞的特征表型是CD3，由此我们可以得到一群CD45+CD3+ 或者CD45+CD3-细胞，同理我们也可以对得到的这群细胞进行进一步划分，最终得到我们的目标细胞群比例测定或者是表型测定。

2.细胞表面分子、胞内抗原的检测与分析

选择与荧光素偶联的抗体或使用一抗和与荧光素偶联的二抗，通过抗原抗体结合原理，实现检测细胞表面分子、胞内抗原表达量的目的，并可以作为一种抗体开发质控检测手段。

3.细胞DNA倍体与周期检测与分析

细胞周期（cell cycle）是指细胞从一次分裂完成开始到下一次分裂结束所经历的全过程，分为间期与分裂期两个阶段，是细胞从2倍体到4倍体再分裂成2倍体的过程。

碘化丙啶（Propidium Iodide, PI）是一种核酸染料。可以与DNA结合，其荧光强度直接反映了细胞内DNA含量。因此，通过流式细胞仪PI染色法对细胞内DNA含量进行检测时，可以将细胞周期各时相区分为G1/G0，S和G2/M三期，从而可通过流式直方图对各时相细胞百分率进行分析。

4.分离纯化，尤其是需要研究细胞功能时，如收集细胞培养上清通过ELISA检测细胞分泌的细胞因子，细胞共培养检测细胞的功能等，都需要得到高纯度的细胞。

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