随着抗体药物研发的深入，对聚合物分析的要求越来越高，市场迫切需求更高性能的SEC技术，解决分离问题，并满足这一方法的特定要求：
既能高效分离聚合物，同时也要保证碎片的准确定量；
能分析传统单抗，对双抗和ADC等新结构也能得到满意的分离；
减少对盐的依赖，使SEC方法更耐用，也提高了SEC MS分析的灵敏度；
减少对pH的依赖，使SEC方法更耐用，方法更有助于抗体制剂的评估；
批次重新性有保证，即开发的方法可以用于整个方法生命周期；
多种粒径，以便实现无缝转移，同时满足常规分析和提速需求。
最新推出的Premier SEC色谱柱，可分离绝大部分样品，而且也仅需一种流动相，因此可以作为平台方法的首选。下面，我们将从这些角度出发，分析Premier SEC作为抗体分析平台的可行性。
01
Premier SEC的分离能力
图1. Premier SEC产品示意图
Premier SEC采用全新羟基化聚环氧乙烷键合相，减少ADC与填料的疏水相互作用。方法开发时，即便不加异丙醇，仍可得到对称的色谱峰（
点击回顾）；
填料孔径扩大到250Å，以提高双抗和融合蛋白等新结构的分离性能，使聚合物和片段的分离度明显提高（点击回顾）；
继续提升单抗的分析性能，对四个上市单抗药物的分析表明，Premier SEC对单抗的聚合物和片段都有更高的分离能力，而且符合美药典专论对单抗分析的要求（点击查看详情）。
图2. Premier SEC分离四种上市抗体药物。
因此，抗体项目的聚集体分析表明，Premier SEC是很好的平台化技术，可满足大多数项目的分离需求，减少色谱柱选择的工作量，提高了方法开发效率。
图3. Premier SEC分析单抗、ADC和融合蛋白的色谱图。
02
Premier SEC减少对流动相的依赖
Premier SEC的创新点之一，在于采用HPS高性能表面技术，将不锈钢金属离子和待测蛋白隔离开，从而减少拖尾的风险。与传统不锈钢色谱柱相比，开发方法时，仅需较低的盐浓度，就可以得到对称的峰形。
图4. 不同品牌色谱柱各种盐浓度的SEC色谱图。
这一技术也降低了SEC分析对pH的依赖，在较宽的pH范围内，抗体始终保持对称的峰形。
图5. 流动相pH对Premier SEC和传统色谱柱峰形的影响。
Premier SEC的这一特色，给SEC方法开发和验证带来了极大的方便；
色谱柱的低吸附，使SEC方法的灵敏度提高，检出限增加了5倍以上。
图6. Premier SEC及不锈钢管SEC的抗体检出限色谱图。
这一性能的提高，有助于聚合物的检出，新色谱柱也不会需要反复老化。而盐浓度的减少，可以增强SEC MS的信号强度，从而提高了方法的可信度；
流动相盐浓度最低可以到50 mM，方法开发将更简单，运行更稳定。还可以采用接近生理盐水浓度的流动相，使数据能真实反应体内给药情境，更有参比意义；
流动相减少对pH值得依赖，意味着可以采用酸性流动相。有些抗体制剂pH偏酸，采用酸性流动相，SEC数据将更有助于评估制剂的稳定性。
图7. 不同流动相条件下Premier SEC分析曲妥珠的色谱图。
03
Premier SEC的重现性
Premier SEC采用专门的抗体标准品进行放行控制，对每根色谱柱进行检测后，基本上消除了批次差异的可能性。
图8. 不同流动相条件下7根色谱柱的重现性色谱图。
04
Premier SEC的方法转换
Premier SEC有两种粒径，即1.7 μm和2.5 μm，可用于HPLC和UPLC分析，同时满足常规分析和提速的不同需求。
图9. 两种粒径Premier SEC(1.7/2.5 μm)分析单抗标准品色谱图。
从上图可以看出，Premier SEC的两种粒径得到的色谱图，分离效果所对应的两种数据几乎完全一致。
综上所述，Premier SEC作为第二代技术，性能得到了全面提升。柱管技术和填料技术提高了SEC的分离性能，色谱柱的通用性明显增强，是现代抗体分析的首选，作为研发的平台化方案可行性很高。
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