液质联用法(LC-MS)是常用的蛋白非变性分析方法,而体积排阻色谱(SEC)则是此类方法的首选技术。由于流动相需兼容MS检测,所以通常采用乙酸铵代替其中的氯化钠,以产生更简单且电荷态更低的离子,从而得到更高质量的去卷积质谱图。
常规色谱柱非常容易与蛋白产生吸附,流动相换成乙酸铵溶液后色谱峰拖尾更明显,降低回收率,影响了SEC-MS数据的可靠性。Premier SEC色谱柱可以解决上述难题,它采用亲水性MaxPeak高性能表面技术,消除了这些额外的次级作用。即便用乙酸铵做流动相仍能确保峰形的对称,这大大提高了检测的灵敏度。从液相色谱图可以看出,采用Premier SEC色谱柱分析0.075 μg的蛋白仍有明显峰形,而常规色谱柱则无法检出。
图1. 抗体的LC-UV检测色谱图(A: Premier SECB常规SEC, 色谱柱无MaxPeak高性能表面)。
图2. Premier SEC在Bioaccord上250次运行的XIC色谱图重现性数据。
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由此看出,Premier SEC采用亲水性MaxPeak技术后,SEC-MS分析只需考虑兼容MS流动相,使这一方法具有更低的检测限、更对称的峰形和更高的回收率。
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