色谱小知识 | 如何正确清洗色谱柱

我们所有的液相色谱柱出库时都储存于特定的出厂溶剂中。对于反相色谱柱，该溶剂通常由有机物（乙腈或甲醇）和水组成。在安装之前，需要先用流动相对色谱柱进行冲洗，然后进行安装，最后再用流动相调节色谱柱之后再进行相关分析。

对于在反相和正相条件下都可以使用的色谱柱，需要特别关注出厂溶剂并确认流动相与出厂溶剂混溶/兼容。如果不兼容，则需要进行溶剂切换。

准备使用色谱柱时，可以通过安装在线过滤器、捕集柱和保护柱来帮助保持其完整性。这些有助于防止污染物损坏我们要使用的 HPLC 分析柱。但是，当污染确实发生时，还是可以采取一些方法进行应对。

色谱柱在使用之后，存放之前，建议对其进行一定的清洗。清洗程序通常包括使用最接近色谱柱上最后一次使用的溶剂组成（等度/梯度）对其清洗，其中需要用超纯水代替缓冲液，以确保从色谱柱中去除缓冲液成分。还可以适当增加清洗液中的有机物百分比，以进一步去除任何疏水性杂质。

如果发现峰形变差并且伴随背压增加，建议对色谱柱进行反向冲洗。在反向冲洗之前，重要的是要确保流动相或柱内溶剂与清洗溶剂混溶，并且流速不超过色谱柱推荐流速的一半。有关详细步骤，请按照色谱柱保养指南中提到的说明进行操作。一般可以使用以下公式确定色谱柱清洗液体积：V = pr2L, 其中 V 是以 mL 为单位的色谱柱体积，r 是以 cm 为单位的色谱柱半径，L 是以 cm 为单位的色谱柱长度。

在使用完成后正确清洗反相 HPLC 色谱柱时，首先将流动相更换为 95% 超纯水和 5% 乙腈，然后以大约 10 倍的柱体积和推荐流速的一半速度对色谱柱进行冲洗以清除任何留在 色谱柱中的缓冲液。然后还可以根据需要逐步改变清洗液的配比，将有机物含量增加到约 95% 乙腈和 5% 水。

反冲过后，在使用前需要将色谱柱正向连接并且用流动相调节色谱柱。

色谱柱使用后的正确存放也很重要，尤其是当要存放很长时间的时候。当色谱柱中仍含有一些缓冲液或离子对试剂时，请务必不要将其存放起来。需用不含缓冲液的流动相以五倍柱体积的量来冲洗色谱柱。对于具有离子对试剂的色谱柱，需要延长清洗时间以将它们从色谱柱中完全去除。清洗后，将反相色谱柱保存在乙腈/水 (65:35 v/v) 中，甲醇可以代替乙腈，正相色谱柱保存在 100% 正己烷或 IPA 中，离子交换柱保存在 100% 甲醇中，HILIC 色谱柱保存在乙腈/水 (80:20 v/v) 溶液中。