No.217｜寡核苷酸的分析利器—CAPCELL PAK ADME-HR

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 第217条推送   每周五17:00准时更新

随着人们对疾病基因相关机制认识的不断深入, 核酸药物因其在基因治疗中的潜在作用而引起广泛关注。目前核酸药物已成为生物医药发展的前沿领域，为支持核酸药物的药代/毒代动力学与药效学研究，核酸药物的分析方法不断进步，除传统的基于核酸分子杂交的酶联免疫法外, 实时荧光定量PCR、基于液相色谱分离的技术法等也展现出广阔的应用前景。

LC-MS 集HPLC 的高分离效率与MS 的高灵敏度、高选择性于一体, 已成为生物基质中核酸药物及其代谢物的定性和定量研究强有力的分析工具之一。

选择与LC-MS兼容的液相色谱分离方法是首先需要考虑的问题。液相色谱和质谱条件的选择也与液相色谱的保留机制、离子化方法、离子化效率等密切相关。

参考文献：程忠哲等，药学学报，2021，56（9），2335-2345。

ADME-HR以其独特的金刚烷键合相，展现出高极性与适当疏水性的完美组合，以高比例有机相/低比例水相为流动相，即可实现强极性化合物(如寡核苷酸)在色谱柱上保留和分离，并且，流动相中高比例有机相, 更有利于提高ESI-MS的灵敏度。

CAPCELL PAK ADME-HR在反相模式下分析高极性化合物时更为有效，如下图所示高极性核酸相关化合物的保留率，ADME(蓝色柱状)较ODS(黄色柱状)的平均保留时间提升到2-3倍。

【色谱条件】

色谱柱：Sub 2 µm; 2.0 or

             2.1 mmi.d. x 100 mm

流动相：10 mmol/L HCOONH4 / CH3OH

             = 95 / 5

流   速：0.6 mL/min

温   度：40 ℃

检测器：UV 260 nm

进样量：5 μL (各待测物10 μg/mL)

今天给大家分享4个使用CP ADME-HR分析核酸药物相关化合物的实验数据，希望能给您的工作带来一些灵感！

1

胸腺嘧啶诱导体、核酸碱基

胸腺嘧啶、嘧啶5位取代的5-羟甲基尿嘧啶、5-甲酰基尿嘧啶、尿嘧啶-5-羧酸以及其他嘧啶类化合物均为极性非常强的化合物。本实验使用可以在100%水系流动相中使用的CAPCELL PAK ADME-HR S5（4.6 mm i.d. x 250 mm）色谱柱，得到了上述化合物的良好保留与分离。

1. 胞嘧啶

2. 鸟嘌呤

3. 5-羟甲基

尿嘧啶

4. 腺嘌呤

5. 尿嘧啶

6. 5-甲酰基

尿嘧啶

7. 尿嘧啶-

5-羧酸

8. 胸腺嘧啶

【色谱条件】

色谱柱：CAPCELL PAK ADME-HR S5 ;

             4.6 mm i.d. x 250 mm

流动相：20 mmol/L NaH2PO4 (adjusted

             at pH 2 with phosphoric acid)

流   速：1.0 mL/min

温   度：40 ℃

检测器：UV 210 nm

进样量：5 μL

2

核酸碱基及代谢物

在人体的核苷酸代谢中，核糖部分解离后，游离的核酸碱基最终代谢成为尿酸，在肾脏中进行排泄。在小鼠等哺乳类动物中，尿酸中的嘌呤骨架开环形成尿囊素。本实验使用能够在100%水系流动相中使用的CAPCELL PAK ADME-HR S5（4.6 mm i.d. x 150 mm）色谱柱，对高极性化合物尿囊素、乳清酸、尿酸、胞嘧啶、尿嘧啶、次黄嘌呤、鸟嘌呤和尿苷进行了同时分析。

1. 尿囊素

2. 乳清酸

3. 尿酸

6. 次黄嘌呤

8. 尿苷

4. 胞嘧啶   

5. 尿嘧啶

7. 鸟嘌呤

【色谱条件】

色谱柱：CAPCELL PAK ADME-HR S5;

             4.6 mmi.d. x 250 mm

流动相：10 mmol/L HCOONH4

流   速：1.0 mL/min

温   度：40 ℃

检测器：UV 210 nm

进样量：5 μL

3

核酸碱基和核苷酸

核酸碱基及核苷酸均为极性很高的化合物。本实验使用CAPCELL PAK ADME-HR S3（2.1 mm i.d. x 150 mm）色谱柱对7种组分进行了分析。

5. 鸟苷

7. 腺苷

1. 胞嘧啶

2. 尿嘧啶

3. 鸟嘌呤

4. 胸腺嘧啶

6. 腺嘌呤

【色谱条件】

色谱柱：CAPCELL PAK ADME-HR S3;

             2.1 mmi.d. x 150 mm

流动相：A) 10 mmol/L HCOONH4,

             B) CH3CN

             B 1%(0 min)->1%(1 min)

              ->40%(15 min)->1%(15.1 min)

流   速：0.2 mL/min

温   度：40 ℃

检测器：UV 254 nm

进样量：2 μL

4

核酸相关物质

以核苷酸的分解产物作为指标是鱼类鲜度的一种判定方法。本实验使用适合于高极性化合物分析的CAPCELL PAK ADME-HR S5（4.6 mm i.d. x 150 mm）色谱柱，对核酸相关物质（ATP相关物质）进行了共同分析。

1. 肌苷酸

2. 三磷酸腺苷

3. 二磷酸腺苷

4. 磷酸腺苷

6.肌苷

5. 次黄嘌呤

【色谱条件】

色谱柱：CAPCELL PAK ADME-HR S5; 4.6 mmi.d. x 150 mm

流动相：25 mmol/L Phosphate buffer

流  速：1.0 mL/min

温  度：40 ℃

检测器：UV 260 nm

进样量：10 μL

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