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维生素E
维生素E（Vitamin E）是一种脂溶性维生素，其水解产物为生育酚，是最主要的抗氧化剂之一。维生素E对免疫系统功能的发挥起着重要的作用，调节血小板的黏附力，防止血小板凝结。同时，维生素E作为抗氧化剂，能防止暴露于自由基而造成的细胞损伤。
5.3 色谱参考条件
色谱参考条件列出如下:
a) 色谱柱:C30柱(柱长250mm,内径4.6mm,粒径3μm),或相当者;
b) 柱温:20℃;
c) 流动相:A:水;B:甲醇,洗脱梯度见表1;
d) 流速:0.8mL/min;
e) 紫外检测波长:维生素A 为325nm;维生素E 为294nm;
f) 进样量:10μL;
g) 标准色谱图和样品色谱图见C.1。
注1:如难以将柱温控制在20℃±2℃,可改用PFP柱分离异构体,流动相为水和甲醇梯度洗脱。
注2:如样品中只含α-生育酚,不需分离β-生育酚和γ-生育酚,可选用C18柱,流动相为甲醇。
注3:如有荧光检测器,可选用荧光检测器检测,对生育酚的检测有更高的灵敏度和选择性,可按以下检测波长检测:维生素A激发波长328nm,发射波长440nm;维生素E激发波长294nm,发射波长328nm。
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▲图1 CAPCELL PAK PFP色谱柱分析色谱图
*注：峰上标数字为分离度。
HPLC Conditions
色谱柱：CAPCELL PAK PFP S5; 4.6mm i.d.×250mm
流动相：水/ 甲醇= 10/ 90
流 速：1mL/ min
温 度：35°C
检 测：PDA 292nm
进样量：5µL
★SPOLAR C18——对脂溶性维生素具有一定拆分能力的普适型C18柱
★SUPERIOREX ODS——高含碳量C18柱（含碳量为24%）
★CAPCELL PAK ADME——键合立体笼状金刚烷基团、对同分异构体具有一定拆分能力
▲图2 SPOLAR C18色谱柱分析色谱图
▲图3 CAPCELL PAK ADME色谱柱色谱图
HPLC Conditions
色谱柱：SPOLAR C18 / CAPCELL PAK ADME
S5; 4.6mm i.d.×250mm
流动相：水/ 甲醇= 10/ 90
流 速：1mL/ min
温 度：35°C
检 测：PDA 292nm
进样量：5µL
样 品：α, β, γ, δ-维生素E的浓度分别为180µg/mL,
372.2µg/mL, 159.2µg/mL, 170µg/mL
▲图4 SUPERIOREX ODS色谱柱分析色谱图
HPLC Conditions
色谱柱：SUPERIOREX ODS S5; 4.6mm i.d.×250mm
流动相：100%甲醇; 100%乙腈
流 速：1mL/ min
温 度：35°C
检 测：PDA 292nm
进样量：5µL
样 品：α, β, γ, δ-维生素E的浓度分别为180µg/mL,
372.2µg/mL, 159.2µg/mL, 170µg/mL
如图4，使用C18 ODS色谱柱在100%有机相条件下依然未能取得4种维生素E的有效分离。
综上所述，使用键合五氟苯基的全多孔型色谱柱CAPCELL PAK PFP，在水/甲醇=10/90的等度条件下，对4种维生素E进行分析，可在16min内得到各物质之间的良好分离与保留；而不论是对脂溶性维生素具有一定拆分能力的普适型色谱柱SPOLAR C18、含碳量高达24%的C18柱SUPERIOREX ODS，还是具有同分异构体拆分能力的CAPCELL PAK ADME色谱柱，均未能得到良好结果。
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