赛默飞混合模式色谱柱方法开发指南 (Ⅰ)

与传统的反相、亲水作用和离子交换色谱柱的单一保留模式相比，赛默飞Acclaim系列混合模式色谱柱的创新型键合相，具有独特的表面化学结构，能够提供特殊的多重保留机制，最大限度的优化选择性。通过调节缓冲盐浓度、pH 值及有机相比例，在Acclaim系列混合模式色谱上，可实现同时保留强极性、中等级性和弱极性组分，也可以同时分离酸性、碱性和中性化合物。

Acclaim Mixed-Mode 系列为双重混合模式 (Bi-modal)，Acclaim Trinity 系列为三重混合模式 (Tri-modal)，色谱柱混合机制如图1 所示。在美国药典(USP)色谱柱分类中，Acclaim Mixed-Mode WAX-1和WCX-1分别归属于L78和L85。

图 1 Acclaim Mixed-Mode 系列和Acclaim Trinity 系列色谱柱多重混合机制示意图（点击查看大图）

Acclaim Mixed-Mode 系列混合模式色谱柱能够在单一键合相上提供多种保留机制，选择性与 C18 反相色谱柱互补。

Acclaim Mixed-Mode WAX-1键合相为带有叔胺末端的疏水烷基链键合硅胶，疏水烃链提供反相保留 (RP)，叔胺端基提供弱阴离子交换 (WAX)，适用于酸性化合物分析，如含羧酸、磺酸官能团结构，有机酸类。

Acclaim Mixed-Mode WCX-1键合相为带有羧基末端的疏水烷基链键合硅胶，疏水烃链提供反相保留 (RP)，羧基端基提供弱阳离子交换 (WCX)，适用于碱性化合物分析，如含伯仲叔胺及季铵结构，有机胺类、含氮杂环结构。

Acclaim Mixed-Mode HILIC-1键合相为带有二醇基末端的疏水烷基链键合硅胶，疏水烃链提供反相保留 (RP)，二醇基端基提供亲水作用 (HILIC)，适用于极性和非极性化合物的分离。

图 2 Acclaim Mixed-Mode 系列双重混合模式色谱柱键合相示意图（点击查看大图）

Acclaim Trinity 系列混合模式色谱柱基于 Nanopolymer Silica Hybrid (NSH，纳米聚合物硅胶杂化) 技术，其设计旨在使方法开发能够取得最大的灵活性。全多孔裸硅胶通过共价修饰键合上具有双重混合模式的官能团，使得硅胶表面带上电荷，而带相反电荷的聚合物微球通过静电驱动自组装工艺与改性硅胶进行杂化，得到Acclaim Trinity三重混合模式。NSH技术可以确保内孔区和外表面具有明确的空间分隔，内外电荷属性相反，从而使其同时具有两种离子交换保留机制，并可独立控制。

Acclaim Trinity P1硅胶内孔区弱阴离子交换和反相保留 (WAX/RP)，聚合物外表面强阳离子交 (SCX)；Acclaim Trinity P2硅胶内孔区弱阳离子交换和亲水作用 (WCX/HILIC)，聚合物外表面强阴离子交换(SAX)；Acclaim Trinity Q1硅胶内孔区弱阴离子交换和反相保留 (WAX/RP)，聚合物外表面弱阳离子交换 (WCX)。

Acclaim Trinity 系列混合模式色谱柱适用于强极性化合物及离子的分析，Trinity P1与Trinity P2选择性互补，为活性药物成分与对离子分析提供全面的解决方案。

图 3 Acclaim Trinity 系列三重混合模式色谱柱键合相示意图（点击查看大图）

表 1 Acclaim系列混合模式色谱柱理化参数

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采用Acclaim系列混合模式色谱柱分析酸性或碱性化合物时，可选择较为“温和”的流动相条件进行试验，如乙腈-25mM磷酸氢二铵(pH=5.0)或乙腈-50mM乙酸铵(pH=5.0)，配合调节缓冲盐浓度、pH 值、有机相比例及柱温，即可快速完成液相色谱条件的优化。目标物特征吸收接近紫外端，可选择磷酸缓冲盐；配合质量型检测器时，须选择挥发性缓冲盐；调节缓冲盐浓度及有机相比例时，应避免出现盐析。在整个方法开发过程中，无须使用离子对试剂，与质谱兼容性较高，可轻松实现方法转移，在食品极性农兽残分析及药物极性杂质谱研究中有着广泛的应用前景。