液相色谱使用关键因素

液相色谱使用

关键因素

液相色谱仪本身：

仪器的校验，刚买回来的仪器一般都是由卖家先对仪器做系统的确认工作（包括IQ、PQ、OQ），每半年会对仪器进行一次的内部校验，目的就是为了保证仪器的正常可运行状态。

液相色谱使用步骤：

1、打开电脑

2、打开主机、预热

3、进入仪器工作站，联机并设定仪器使用方法及仪器参数

4、启动泵的动力系统预处理(排气等)

5、检查是否漏夜、柱压是否正常

6、设置仪器方法，包括仪器的使用条件等

7、激活操作方法，等待仪器平衡、基线平直

8、仪器出现“Ready”后可进行样品分析

9、操作测试结束后，清理所有实验材料，做好清洁卫生

10、记录仪器使用日志，并与管理员办理交接手续

另外如果需要关机的情况，可以参考以下：

短期停机

在完成一天工作以后，都要停机等第二天再继续工作，则可按以下步骤停机。

A）关闭二次仪表（记录仪、积分仪或色谱工作站）。

B）关闭检测器电源（同时切断柱箱温度检测器的电源）。

C）停止恒流泵工作，然后切断其电源。

D）用二次蒸馏水冲洗进样阀的进样孔（在“LOAD” 和“INJECT”两个位置）。

E）切断实验室工作电源，加满盛液瓶中的流动相，待第二天使用。

F）将仪器罩上防尘罩。

长期停机

仪器须数周或数月暂不使用，这时除按《短期停机》的A）～ D）步骤处理外，还须完成以下步骤：

A）拆下恒流泵的流动相盛液瓶，换上色谱柱指定的保护试剂（例：甲醇、去离子水等），开启泵数分钟 （流速0.5 mL/min ~ 1.5 mL/min）后停泵。

B）从系统中拆下色谱柱，用专用的密封螺帽将柱管两端密封后保存。

C）用普通φ1.6导管替代分离柱联结。

D）用二次蒸馏水或去离子水输入输液泵，开启泵，流量1mL/min~2mL/min， 冲洗泵体、进样阀、检测器流通池数分钟，在冲洗过程切换六通阀数次，使定量管得到清洗。

E）拆除替代柱的导管、泵输入端和出口的导管和流通池输入、输出口导管， 分别用螺帽密封输液泵出口和流通池输入、输出口。

F）拨下总电源接线板的插头，贮存好专用的流动相和样品，用干布擦洗仪器，罩上防尘罩。

G）检测器存放地点应干燥。

色谱条件

色谱条件一般包括流动相、色谱柱、检测波长、流速及进样量。流动相就涉及到配制流动相所用到的水和试剂试液，水一般要求用超纯水或其他水的电阻率不大于18.2兆欧级别，试剂试液要求用色谱级别的，原因为防止水和试剂试液中的杂质对色谱结果的干扰。

色谱柱会因不同的品种而有不同的要求，但每根色谱柱都有它的清洗要求，这个在色谱柱说明书上都可以找到，一定要根据上面的要求进行，否则会造成色谱柱效下降和色谱柱的使用寿命缩短，检测波长也会因品种的不同有不同的要求，这里需要指出的是要注意观察检测器氘灯能量的变化，比如基线波动大，活性成分的响应值突然变小等，都有可能是氘灯的能量不足所引起的，氘灯一般建议使用800小时，但实际上使用时间不止，可根据实际情况更换。

流速也因品种的不同而不同，一般为1.0ml/min，流速是不可随意改动的，特别是作为QC人员，但是作为研发人员，有时为了摸索条件或进行方法耐用性验证，会对流速进行改变以评价方法的适用性。对于进样量因不同的品种也有不同规定，进样量这块现在都使用自动进样，所以进样精密度都很好，不需强调什么。

操作人员

首先，作为液相操作人员，需要对仪器使用进行相关培训和具体操作，掌握液相硬件和软件的操作，掌握日常的维护保养，掌握最基础故障的排除和维修。需要特别指出的是对于液相的日常维护保养很重要。

其次，操作人员在配制液相分析用样品溶液时，最好由同一个人单独完成，以免不必要的偶然误差。

使用需注意：

1、液相色谱的流动相应采用色谱纯溶剂，以满足仪器要求、避免损坏色谱柱;

2、严禁使用有污染的水等冲洗色谱柱，避免将互不相溶的溶剂一同进入泵内;

3、流动相需经过滤、除气后方可使用;

4、待分析的样品必须彻底溶解澄清、过滤，以避免堵塞、损坏色谱柱;

5、分析完成后，须注意及时清洗色谱柱和检测器的比色池

液相安装环境

液相色谱仪应尽量安装于水平、远离振动、电磁干扰的屋内的台面上，有条件的话尽量将液相数据处理系统分隔开，一个是防止色谱基线噪音偏大，基线不稳等，一个是为减少对人体的危害。

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