大阪曹達｜三耀精细
第165条推送 每周五17:00准时更新
客户提供红花样品，希望大曹色谱按照20版《中国药典》，完成红花含量测定项下羟基红花黄色素A的测定。通过色谱柱筛选，并尝试在不同柱温下对样品进行测试，我们最终得到红花样品的良好分析结果。
20版药典方法
【含量测定】
羟基红花黄色素A 照高效液相色谱法（通则0512）测定。 色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-乙腈-0.7%磷酸溶液（26：2：72）为流动相；检测波长为403nm。理论板数按羟基红花黄色素A峰计算应不低于3000。 对照品溶液的制备 取羟基红花黄色素A对照品适量，精密称定，加25%甲醇制成每1mL含0.13mg的溶液，即得。 供试品溶液的制备 取本品粉末（过三号筛）约0.4g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入25%甲醇50mL，称定重量，超声处理（功率300W，频率50kHz）40分钟，放冷，再称定重量，用25%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。 测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪，测定，即得。 本品按干燥品计算，含羟基红花黄色素A（C27H32O16）不得少于1.0%。
由于羟基红花黄色素A方法中流动相使用0.7%磷酸溶液，pH较低（约1.4），超过常规C18色谱柱pH使用范围，容易导致固定相水解断裂，影响色谱柱寿命。
因此大曹色谱使用pH耐受范围1-10的特殊耐强酸型色谱柱CAPCELL PAK C18 ACR S5 4.6mm i.d.× 250mm，按照20版《中国药典》方法，对客户提供红花样品进行分析。
20版药典方法测定结果
红花样品分析色谱图
红花样品分析色谱图局部放大图
HPLC Conditions ：
色谱柱：CAPCELL PAK C18 ACR S5;4.6mm i.d.×250mm
流动相：甲醇-乙腈-0.7%磷酸溶液（26:2:72）
流 速：1.0 mL / min
温 度：35°C
检 测：UV 403nm
浓 度：取样品粉末0.4g，加入25%甲醇50mL，超声提取40min，补足重量，过0.22µm滤膜
进样量：10µL
如上图所示，样品分析中羟基红花黄色素A保留时间为11.036min，与前后基质峰均能够实现基线分离，主峰峰形略拖尾，理论塔板数3682，能够满足药典大于3000要求。
温度验证
由于该方法中未规定柱温，我们分别尝试在25、35、45℃下对红花中的羟基红花黄色素A进行分析。实验结果表明，柱温越高保留时间越短，理论塔板数有明显上升趋势，在45℃柱温下理论塔板数可达到5000左右，但由于该方法中pH较低，提高柱温对于色谱柱整体寿命可能产生影响，客户可根据实际需要选择合适柱温分析。
另外，我们建议实验完毕后及时使用甲醇水进行冲洗替换流动相，在分析过程中请注意压力变化。
综上所述，对于红花样品中羟基红花黄色素A的分析，可使用CAPCELL PAK C18 ACR S5 4.6mm i.d.× 250mm色谱柱完成，理论塔板数满足2020版药典要求，可以得到稳定良好的结果。
如果您还有其他技术问题, 欢迎致电我们的技术中心，电话：010-59941900。
如果你有采购需求，可在公众号的聊天对话框中输入您所在的地区，例如“北京市”、“河北省”，就会收到该地区负责人的联系方式啦。
首页
