华谱告诉您如何快速检测乳制品中的维生素A、D、E

华谱科仪

2022.10.12

作者华谱科仪

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前言

维生素A、维生素D和维生素E是维持机体正常代谢和机能所必需的脂溶性维生素。由于人和动物不能合成维生素，必须依赖食物来提供足够的维生素。而牛奶、配方奶粉等乳制品是脂溶性维生素强化的重要形式之一，因此对其准确测定显得尤为重要。

国家现行标准《GB 5009.82-2016》覆盖了婴幼儿食品、乳品等多种食品，实现了维生素A、D、E的含量测定。其中，维生素D在食品中含量低，样品基质复杂，检测相对困难，在国家现行标准法中采用液-质联用或半制备正相净化的方式对其进行检测。但液-质联用维护成本高，半制备正相处理过程极其繁琐，大大影响样品分离效率。

如何能在简化操作流程的基础上提高分离效率一直是华谱方案开发的理念。基于此，华谱采用在线二维液相色谱法，一次进样就可以实现样品中维生素A、维生素D及四种维生素E异构体的同时测定分析，不仅操作简单，而且分析效率大大提高。

图1. 华谱S6000二维液相色谱仪

华谱采用中心切割法实现乳制品中的维生素A、维生素D及四种维生素E异构体的分析。该方案分析包含三个阶段（见图2）：

第一阶段：第一维检测VA，此时阀的位置为1-6；
第二阶段：捕获净化VD₂、VD₃，此时阀的位置为1-2；
第三阶段：第一维继续分析VE，第二维分析VD₂、VD₃，此时阀的位置恢复为1-6。

图2. 中心切割法同时分析VA、VD与四种VE的阀切示意图

实验结果

① 实际样品测定

用上述方法测定VA、VD₂、VD₃和四种VE标准品，结果如图3所示，VA和四种VE异构体在第一维均能实现基线分离（β-VE和γ-VE分离度为1.8），VD₂、VD₃在第二维实现基线分离（VD₂和VD₃分离度为2.1）。对实际样品中（包括特医食品、婴幼儿配方奶粉、老年配方奶粉）的维生素进行测定，测定结果如图2所示，实际样品中的各维生素均实现了基线分离，测定结果表明不受基质杂质干扰。

图3. 维生素ADE标准品及样品色谱图

② 线性、检测限、定量限

实验针对VA、VD及VE进行了线性、检测限及定量限的考察，具体结果见表1。取7种维生素标准溶液配制成不同浓度的混合标准溶液，以待测物峰面积为纵坐标，待测物浓度为横坐标绘制标准曲线，VA、VD及VE的线性相关系数R²均大于0.999。以S/N=3为检测限，S/N=10为定量限，7种维生素的检测限和定量限均低于国标要求。其中以VD₃的测定为例，由于乳品中的VD₃含量很低，且干扰较多，通过本实验测定的VD₃的检测限为0.56 μg/100 g，定量限为1.4 μg/100 g，满足了低浓度定量检测需求。

表1. 维生素A、D和四种维生素E的线性、检测限以及定量限

③ 重复性

以实际样品考察方法重复性，连续进样5针（见图4）。各维生素保留时间及峰面积RSD结果如图5所示，保留时间的RSD在0.02%~0.1%之间，峰面积的RSD在0.6%~2.4%之间，结果表明该方法在连续进样时重复性良好。

图4. 特医食品中维生素ADE重复性色谱图

图5. 特医食品中维生素ADE重复性结果

④ 加标回收率

取奶粉样品，添加7种维生素A、维生素D、维生素E混合标准溶液，按照前处理方法进行处理，考察回收率。测定两个不同浓度水平的加标回收率，每个浓度水平平行3份。结果表明各维生素的回收率均在80%~105%，方法的相对标准偏差( RSD) 在0.3% ～3.8%之间（见图6）。

图6. 维生素ADE回收率测定结果

结论

本文在现有国标处理方法的基础上优化维生素ADE的分析方法，一次进样就实现了VA、VD及四种VE异构体的分析测定，方法验证表明该方法灵敏度高，专属性强，除去了样品中的杂质对维生素ADE的分析干扰，简化了乳品中微量VD的分析检测，同时实现乳品四种VE异构体的良好分离。因此，该方法是分析乳制品中脂溶性维生素的快速有效手段。