(图片来源:包图网)
梯度洗脱可用于处理不能以等度洗脱分离的样品,而最常见的使用梯度的因素是多成分保留能力不同,无法在等度洗脱中全洗脱出来,或以等度方式无法达到满意的分离效果。总结下来,以下几种情况,可以采用梯度洗脱:
1、多组分样品的极性范围大,用等度无法全部洗脱的样品;
2、大分子样品;
3、改善峰峰型;
4、目标峰出峰后,短时间内提高有机相比例,洗脱强保留干扰杂质;
5、用等度洗脱无法达到分离的情况。
(
#01
目标峰出峰后,短时间内提高
有机相比例,洗脱强保留干扰杂质
在检测复杂成分的样品时,往往存在些强保留物质,采用等度,无法把强保留的杂质洗脱下来,一针哪怕采集再久,也会有未知杂质干扰后面进样的效果,这种情况下,可以增加梯度洗脱,使强保留成分在梯度上洗脱出来的方式来解决。
示例:
等度第一、二针,保留时间为19分钟处
的峰没后没有干扰峰
第三针开始,此处出现未知杂质峰干扰,
应为第一针的强保留物质在第三针出峰
30分钟开始,增加梯度洗脱,
以洗去强保留杂质,连续进样,均无干扰
由上面三张图可见,此中药,在采用等度洗脱时,因有强保留未知杂质,连续进样,会在后面的进样出峰,干扰检测。在待测成分出峰后,增加梯度,提高有机相比例,强保留物质在当针就洗脱下来,连续进样确认,效果能完全重现,后面进样不会出现未知干扰峰影响。
#02
用等度洗脱无法达到分离的情况
有些物质,特别是结构相近的物质,等度条件下无法达到分离,而采用梯度模式,因组分在有机相变化的选择性差异,可以达到分离,这种情况下就需要采用梯度条件进行测试。
示例:
2,3,6-三氯吡啶
2,3-二氯吡啶
2,6-二氯吡啶
采用等度洗脱,三个物质出了两个峰,
无法使三个成分同时达到分离
采用梯度洗脱,三个物质能完全分离,
满足检测需求
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