核苷酸是乳制品尤其是奶粉品质检测的一个重要指标。
核苷酸是由一个核苷与磷酸合成的，4种核苷酸组成核酸。
核苷酸主要参与构成核酸，许多单核苷酸也具有多种重要的生物学功能，如与能量代谢有关的三磷酸腺苷（ATP）、脱氢辅酶等。
某些核苷酸的类似物能干扰核苷酸代谢，可作为抗癌药物，此处省略1万字，以免班门弄斧。
接下来说我们今天的主角-人体必需的五种核酸。
在奶粉中加入这五种核酸可以促进血液循环，改善脑机能，增强体质和提高免疫力。作为负（yao）责（zhuan）任（qian），有(zheng)担(da)当(qian)的奶粉生产厂商们，当然选择了添加。
同时2017年3月1日正式实施的中国食品安全的国家标准GB 5413.40—2016（婴幼儿食品和乳品中核苷酸的测定方法）里也明确了婴幼儿食品和乳品中五种核苷酸检测方法。
方法中使用C18色谱柱，流动相为磷酸氢二钾和磷酸二氢钾混合溶液加四丁基硫酸氢铵这种离子对试剂。
自标准颁布以来，默克应用实验室一直有收到相关的各种反馈，归纳后如下：
1、该流动相的pH控制极其严格，些许的pH偏差就会导致分离度达不到要求。
2、因为使用到离子对试剂，色谱柱的平衡时间较长，对色谱柱损伤严重，色谱柱柱寿命通常较短。
3、该方法下对CMP与杂质达不到基线分离。在GB5413.40—2016方法的附图中可以清楚看到CMP与附近杂质有部分重合。
Zic-HILIC这种大极性样品分析色谱柱不能容忍这种问题再继续折磨大家！
经过实验室应用工程师的加班加点，一个全新的检测五种核苷酸的方法横空出世。
细节是这样的：
标准溶液：称取适量的CMP， AMP，UMP，GMP 和IMP或其钠盐对照品，加水溶解成浓度为12，12，12，6，6 µg/mL的对照品溶液。色谱图和色谱数据如下图1和表1所示：
图1，标准溶液进样色谱图
大家关心的奶粉样品的图谱分得怎么样了？请见图2.
图2. 奶粉样品按国标方法处理后，进样所得色谱图
从色谱分离数据来看，五个核苷酸分离度均大于1.94，达到了基线分离。色谱峰峰形对称。色谱峰理论塔板数均在5500以上。在配方奶粉样品测试中，五种核苷酸均能和附近杂质基线分离。CMP AMP UMP GMP 和 IMP的检测限（LOD） 分别为： 0.17，0.38，0.22，0.46 和 0.39 µg/mL。CMP，AMP， UMP， GMP 和IMP 的定量限（LOQ）分别为： 0.53， 1.16， 0.65， 1.39 和1.17 µg/mL 。
综上，方法优势：
无需使用离子对试剂，色谱柱平衡更快。
亲水分配作用机理完全不同于C18色谱柱的疏水分配作用，流动相配制简单。
样品处理简单。无需做额外样品处理即可实现CMP与杂质的基线分离。
最后的最后，我们的主角
HILIC要和大家见面了，准备了好么？
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