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基于PCR的基因分型实验—用银染的方法无放射性的分析SSLP

2019.4.11
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zhaochenxu

致力于为分析测试行业奉献终身

实验材料

PCR 扩增 SSLP 的变性聚丙烯酰胺凝胶

试剂、试剂盒

乙醇硝酸硝酸银染色溶液显色液乙酸

仪器、耗材

Whatman 滤纸染色仪器80℃真空电炉

实验步骤


1.电泳后,小心的打开仪器,分开玻璃板。将有胶的那块板子放于染色一起的底部,仔细地将上面的架子和垫圈放置于胶边缘的上面,拧紧闩子。

胶里如果有小空隙的话将会使溶液从胶和玻璃板间流出,可以通过加(逐滴注入)一点含有高农度过硫酸铵的 Sequagel-6(NationalDiagnostics) 将缝隙填满,胶将会快速地聚合。

2.在 10% 的乙醇里洗胶 5 min,然后倒掉乙醇,在 1% 的硝酸溶液里氧化胶 3 min,倒掉硝酸溶液。用水漂洗胶 5s,然后倒掉水。

3.加硝酸银染液,盖好一起以防透光,染 20 min 后,倒掉硝酸银溶液并按安全的规章制度处理这些溶液,用水漂洗胶 5 min 后倒掉。

4.加显色液还原胶(溶液最初的颜色是黄褐色),轻轻地晃动染色仪使溶液没过胶,倒掉再加人新鲜的显色液,直到溶液不再改变颜色,溶液变清(溶液变清大约 2 min 后,条带将开始显现)。

5.在条带开始显现而胶边棕色前将展开液倒掉(避免展开过度),在 10% 乙酸中、浸泡 1 Imin 终止展开,倒掉乙酸溶液,用水漂洗 5s。

6.将 Whatman 的滤纸直接放到胶上,轻轻地把胶从玻璃板上转移到滤纸上,直空干胶 lh,记录结果。切掉多余的胶保存有结果信息的部分(真空抽干的胶可以 2 年而没明显的信息丢失)。


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