3. 结果与讨论
柱前衍生反应中目标代谢物均有
1~3 个酚羟基或胺基位点与苯甲酰基结合(乙酰胆碱与抗坏血酸除外),这所带来的疏水性增加与
ESI电离活性改善,使得本方法相较于未衍生直接分析方法的特异性与灵敏度显著提高。图 2 为实验条件下各个代谢物的色谱图,均峰形对称良好。图 3
为多巴胺与高香草酸衍生产物的 MS/MS 谱图及其裂解规律,苯甲酰衍生产物 MS/MS 断裂时会产生极其优势的 m/z 105.1C7H5O+
碎片,这也非常有助于保证检测方法灵敏度提高的显著性。
图 4为利用 TraceFiner软件对本实验代谢靶标定量数据处理后的结果界面, TraceFinder高度集成的信息展示与并行处理能力,尤适合于大样本代谢靶标分析中的高通量数据处理。本实验采用的柱前衍生方法操作简便,反应迅速充分。方法学考察表明,代谢靶标分析方法的线性、重现性与稳定性良好,利用 TSQ Quantam Access MAX 质谱能获得远低于 ng/mL(ppb)级的检测灵敏度,完全能够满足这类神经活性物质生理浓度测定的技术要求。表 4 为利用本文方法对神经药理学实验中正常小鼠脑脊液实际样品进行测定的部分结果。
4. 结论
本文利用 TSQ Quantum Access MAX 串联液质与苯甲酰化柱前衍生建立了一种对脑脊液与脑微透析液中痕量神经活性物质群进行快速高灵敏度与高特异性检测的代谢靶标分析方法,可应用于神经生物学、神经药理学等相关研究领域。
参考文献:
[1] Andrej Kovac, et al, Talanta 119 (2014) 284–290
[2] Peng Song, et al, Anal. Chem. 2012, 84, 412-419