试剂盒中未提供的所需器材
蒸馏水；量筒；试剂瓶；加样枪；吸水纸；计时器；橡胶手套
—酶标读数仪 如芬兰Labsystems Multiskan
—板的振荡器 如芬兰Labsystems iEMS Incubator/Shaker
—洗板机 如芬兰Labsystems Multiwash
—8-道加液器（50—300μl）
—（3mm）打孔器
标本的收集和处理
婴儿出生后3—5天，用滤纸从婴儿的足跟取一滴血液，获得带血点（直径0.8cm）的滤纸片，并确信滤纸片被血样完全浸透，带血样的滤纸片至少晾干2小时，带血样的干燥滤纸片（密封）在+4--+8℃至少可贮存4个月时间。
滤纸片标本的收集一定是单一的一滴血液，否则会造成假阳性结果。这一滴血在滤纸片上扩展的面积要足够大，保证血液从滤纸的上面均匀浸透到下面，浸透不完全会造成测定的TSH量偏低。采血点应稍微靠近足跟的左表面皮肤，最好抹掉第一滴血，用随后形成的血滴。为提高婴儿足跟针刺点血流，婴儿足跟可用热的（约42℃）湿毛巾敷3分钟。不要过分挤压足部，否则会导致溶血或组织液的稀释。一滴血形成后，用滤纸片轻轻地接触血滴，但不要向足跟挤压，从滤纸背面观察血滴透过滤纸。
一般一个婴儿要收集三个血点（三滴血）的滤纸标本，血样点应避免污染。置滤纸于水平位置，室温空气干燥2至6小时。注意不要加热，不要堆积，不要接触其他物品表面。将每个带血标本的滤纸片置于一个信封中，并邮寄到新生儿筛查中心实验室。实验室收到标本应放置+4--+8℃防湿保存，并及时筛查。
标本收集卡应注明以下内容：医院名称，编号，婴儿姓名，出生 年 月 日，住院号，家庭地址，电话和采血日期。
警告—有潜在生物危险的材料
标准品，对照虽然已经灭活，但不能绝对认为无传染性，应认为有潜在的传染可能。标本等的处理按生物安全二级水平处理。详见美国疾病控制中心国立健康研究所的“微生物和生物医学实验室生物安全”手册。（1984）
操作步骤
操作步骤简图
第一步 | 用打孔器在滤纸上打下3mm直径的标准品，质控和标本，并依次放置到包被板孔内。 |
第二步 | 用酶标记抗体稀释液将酶标记抗体按1：100倍稀释，每孔加入200μl。 室温振动（650rpm）孵育2小时 或室温振动（650rpm）15分钟后，+4℃不振动过夜。 |
第三步 | 去掉标本的滤纸片，洗涤液洗涤4次，每次加入300ul。 |
第四步 | 加入200μl的底物溶液 室温避光孵育15分钟 |
第五步 | 加入100μl1N终止液 在波长450nm下测定吸光度值。 |
检测前，把所有的试剂和酶标反应板放置室温+20--+25℃预热30分钟。
1.用打孔器在滤纸上打下3mm直径的标准品（双孔），质控（双孔）和标本（每孔1片），并依次放置到抗-hTSH包被的酶标板孔内。
注意：围绕血样点中央对称地打孔。
2.用酶标抗体稀释液将酶标抗体按1：100倍稀释，每孔加入200μl酶结合物溶液。
3.孵育
A：室温（不超过+30℃）振动（650rpm）孵育2小时。（贴上粘纸）
B：室温振动15分钟后，+4℃不振动过夜。（贴上粘纸）
注意：当室温>+30℃时，应选择过程B。
4.倒去溶液和吸去滤纸片。
5.洗涤
——手工洗涤
每孔加入300μl的洗涤液（试剂5）；
倒去，拍尽液体；
重复操作4次；
4次洗涤后，轻轻倒拍几次酶标板，倒放在纸巾上一会儿，吸尽残液。
——机器洗涤
洗涤液每孔400μl，重复洗涤4次。
6.每孔加入200μl的底物溶液（试剂4a＋4b）。
7.室温 (不超过+30℃)避光孵育30分钟。（若室温高于+30℃，则避光孵育15分钟。）
8.每孔加入100μl1N终止液。
9.在450nm波长下测定各孔的吸光度值。
结果
结果的计算：
绘制标准曲线，纵坐标为吸光度，横坐标为标准品的浓度，从标准曲线上读取质控和标本的浓度。
质量控制值
每批试剂盒的每套试剂盒内都要一张单独纸片，给出质控的期望值，只有质控测定值在期望值范围内，结果才能被接受。
期望值和结果说明
对于正常的和假定的阳性之间的区别，是根据一个预定的临界值。临界值是根据给定的正常人口hTSH值的参考范围，凭经验设定的，高于或接近临界值的标本建议复试。
性能特点
敏感性 最小浓度为0.9mIU/L
精确性
批内分析
批内分析不精确度
批间分析
批间分析不精确度
其他脑垂体激素和人绒毛膜促性腺激素干扰实验
LH FSH HCG 干扰实验检测 在含10 mIU/LTSH血清中加入一定数量的每种激素。
胆红素干扰实验
在浓度为0.05-10g/l,无干扰现象。
准确性
用CDC质控标本检测
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