SPE 和 LC 工作条件

载样泵： 管路 A:100% 水
管路 B ： 100% 甲醇
载样流速： 4.0 mL/min
清洗液： 20% 的甲醇 / 乙腈（ 30/70 ） +0.5% 甲酸
再平衡泵： A ： 50/50 的甲醇 / 丙酮
B ： 80/20 的乙酸乙酯 / 丙酮
C ： 80/20 的正己烷 / 丙酮
再平衡流速： 4.0 mL/min
萃取柱： Oasis HLB 2.1x 2 mm ， 25.0 μ m
分析柱： XBridge C18 2.1x 50 mm ， 3.5 μ m

结果和讨论

图 2 为添加了 0.5ppb 每种抗生素的牛奶样品的具有代表性的提取离子色谱图。抗生素在微量水平都具有良好的信号和峰形。对于食品样品，样品的复杂度要高于饮用水样品，而且清洗步骤需要优化以最大程度的清除干扰物质，而不洗脱掉所感兴趣的分析物。图 3 为添加了 100ppb 红霉素，分别用 5% 、 10% 、 20% 、 30% 和 40% 甲醇清洗的色谱图。在图 2 中， 20% 甲醇清洗与 5% 甲醇清洗相比，会产生更高的信号。 5% 甲醇的弱信号可归因于离子抑制效应。可是，当清洗步骤中的有机相比例增加的过多时，信号的灵敏度由于部分洗脱而有下降趋势。

图 4 为红霉素浓度从 1.0ppb 到 500.0ppb 、线性系数为 0.9902 的校正曲线图。表 2 是在线和离线 SPE 萃取方案肩并肩的对比，从文献到处理天然的牛奶样品到适于 LC/MS 或 GC/MS 分析的理想形态。当评价在线 SPE/LC/MS/MS 和离线方案时，通常的萃取程序和溶剂、实验室人员和时间的整体应用都是很重要的。其它的食品样品有各种各样的结构，在 SPE 萃取前可能需要其它的处理程序。例如，牛奶样品在用 SPE 装置进一步净化前需要简单的蛋白沉淀和离心。对于像

图 2 添加了 0.5ppb 的牛奶的提取离子色谱图

图 3 牛奶提取的优化清洗

图 4 红霉素的校正曲线

水果和蔬菜这样的固体样品，使用萃取缓冲液的低温碾磨或均质化步骤是优先考虑的方法。对于通常的萃取程序，很容易找到每个萃取步骤都使用广大范围的体积和时间的文献报道。通常，使用 SPE 方案，上样、清洗和洗脱体积都根据 SPE 装置的床台尺寸估量。这可以首先保证在每个步骤中 SP E 吸附剂的整体润湿。一旦这个数值定下来，这可以增加数倍 ( 依赖于化合物 ) 确保多个体积置换以使清洗步骤最小化清除干扰和洗脱步骤最大化回收率。在实际的操作中，柱床上样量诱捕能力的增加需要 SPE 程序中体积的增加；这最终会增加样品制备时间和溶剂消耗量。

结论

在过去的这些年里，许多国家已经尽了很大努力来进一步提高他们的国内和进口的食品供应的安全性，以使消费者能够享受安全的食品供应。正因为这样，许多分析方法都可以得到，并在常规的分析中被使用。随着最小化溶剂使用量和最大化实验室人员使用的需求增

加，自动化平台的使用绝对会满足这些要求。这篇应用文献描述了牛奶样品中抗生素的自动化萃取和分析。传统的萃取前处理步骤是极其消耗时间的；他们需要更大数量的化学品和各种各样的试剂。使用 Waters AquaAnalysis 系统处理牛奶样品的时间大约为 20min ，这与离线方案相比可以减少 70-90% 的时间。

表 2 牛奶样品的离线和在线萃取方案的溶剂消耗量和处理时间

参考文献

[1] U.S. FDA National Milk Drug Residue Database. Food and Drug Administration, Center for Food Safety and Drug Administration, 2007.
Available online: http://www.cfsan.fda.gov/~ear/p-mis.html
[2] W A Moats, M B Medina. Veterinary Drug Residues, ACS Symposium Series 636, American Chemical Society, Washington, DC, 1996, p.5.
[3] 43rd Meeting of the Joint FAO/WHO Expert Committee on Food Additives. Evaluation of Certain Veterinary Drug Residues in Food, WHO Tech. Rep Ser., No 855, 1995, p.85.
[4] J Wang, D Leung, S P Lenz. J. Agric. Food Chem. 54: 2873, 2006.|
[5] M Dubois, D Fluchard, E Sior, P H Delahaut. J. Chromatogr. B.753: 189, 2001.
[6] S B Turnipseed, W C Andersen, C M Karbiwnyk, M R Madson, K E Miller. Rapid Commun. Mass Spectrom. 22: 1467, 2008.