反相保留性能：分析pH值如何影响反相色谱分析中的保留时间和稳定性是很重要的，为了得到可电离化合物的最佳保留性能，被测物不应带电或被离子化，因此酸性被测物应该使用低pH值，碱性被测物应该使用高pH值，中性材料不带可电离基团，因此不受pH值影响。这些曲线也可被看作滴定曲线，其拐点是分子的表观pKa值，因为pH值的微小变化就能导致保留时间和选择性的急剧变化，所以测试方法采用的pH值不能位于分子pKa附近，稳定区域是曲线的水平位置部分。
pH值选择和色谱柱选择：此色谱图中，由于帕罗西汀及其相关化合物的带电状态发生变化，pH
10比pH 3在BEH C18色谱柱上的保留时间更长，在这一点上，由于具有更高分辨率和更好的选择性，pH
10是适合被测物的pH值。下一步是评估在相同pH 10值下三种不同色谱柱的色谱图，以选择具有最佳分辨率的色谱柱。与其它纯硅胶色谱柱相同，HSS
T3色谱柱只能用于pH值2-8环境下，因此不在评估之列，三种色谱柱都显示了可检测所有组分的能力，由于C18的通用性，因此选择BEH
C18色谱柱来对比不同有机改性剂的选择性。
选择有机改性剂
用于反相分离的典型溶剂是甲醇和乙腈，除了通用性外，还具有良好的化学特性，两者的洗脱能力和粘度不同，甲醇中存在氢键，具有不同的独特选择性。
·甲醇
- 弱洗脱剂
- 带氢键溶剂
·乙腈
- 非质子溶剂
- 强洗脱剂
- 低粘度
选择溶剂：如上色谱图显示，甲醇是比乙腈更弱的洗脱剂，因此表现更长的保留时间，而乙腈对此类被测物中的所有组分具有更好的分离性能，因此采用BEH C18色谱柱和乙腈溶剂在pH值为10的条件下继续优化分离。
测试方法优化
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