实验材料 动物组织
试剂、试剂盒 乙酸乙酯丙酮甲醇乙腈
仪器、耗材 离心管鸡心瓶SCX柱
实验步骤
1. 提取
称取5 g（准确至0.01 g）样品于50 mL离心管中，加入20 mL乙酸乙酯，均质1 min后，超声提取5 min，再以3000 r/min的速度离心10 min，取上清液转移至鸡心瓶中。再用20 mL乙酸乙酯重复提取一次，合并上清液于同一鸡心瓶中。
2. 净化
将提取液于40 ℃下旋转蒸发至近干（不能全部蒸干），用5 mL乙酸-乙酸乙酯（5 + 95）溶解，将溶液转移到预洗过的SCX柱上的贮液器中，再用 5 mL乙酸-乙酸乙酯（5 + 95）洗鸡心瓶，洗液一并转移到SCX柱【经5 mL乙酸-乙酸乙酯（5 + 95）预洗】上的贮液器中，打开活塞，以2 mL/min流速滴下。依次用2.5 mL丙酮、5 mL甲醇、5 mL乙腈在2 mL/min流速下淋洗柱子，用5 mL氨水- 乙腈（5 + 95）洗脱。弃去前2 mL，收集后面的洗脱液于玻璃管中，在40 ℃水浴上用氮气小心吹干，用水定容至1 mL，旋涡振荡或超声溶解，过0.45 um滤液膜后， 进行HPLC分析。
3. 液相色谱条件
流动相：
A：水；
B:乙腈；
C:甲醇。
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