快速细胞破碎法实验步骤和转化子DNA的酶切鉴定

快速细胞破碎法实验步骤

1、 挑取转化平板上的单菌接种于含相应抗生素的2ml LB中，37℃振荡培养至A590值为0.6～0.8。

2、 取1ml菌液至1.5ml Eppendorf管中，9000rpm离心9min，去尽上清。

3、 加入70μl Cracking Gel缓冲液[1mol/L Tris –HCl(pH6.8)10ml,20%SDS 10ml, 250mmol/L EDTA 1.6ml,蔗糖27.2g, 1.2%溴酚蓝1.67ml，加双蒸水至200ml]，混匀后，37℃水浴30min以上。

4、 15000rpm离心15min。

5、 吸取上清点样电泳，观察。

转化子DNA的酶切鉴定

转化子DNA的快速少量抽提

1) 菌液移至5ml Eppendorf 管中，9000rpm,离心9min，去上清。

2) 加溶液Ⅰ100μl，溶液Ⅱ200μl，溶液Ⅲ150μl，混匀，冰浴10min。

3) 15000rpm离心15min。

4) 吸取上清，加入异丙醇1ml混匀，置室温15～30min。

5) 15000rpm离心15min，弃上清，加入75%乙醇洗涤2次。

6) 离心弃上清，真空抽干，加入适量1×TE溶解DNA。

7) 取少量DNA电泳，观察浓度。