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经典的PCR程序包括三步:模板变性,引物与模板配对,延伸;这三步的温度一般都不相同。两步法指的是在引物与模板配对,延伸这两步中采用同一温度,使得这两步在同一温度下进行。这样传统的三步法就变成了两步法,一般适用于GC含量高或引物Tm值高的反应。