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如果是分开酶切的话，第一个酶切完成后要回收（可用醇回收，效率比较高）后，再进行第二次酶切。
做转化的时候，进行酶连接反应时，注意保持低温状态，因为LIGASE酶很容易降解。为保险起见，一般连接3小时，16度；对含有AMP-RESISTENCE的质粒铺板时，注意加AMP时的温度，温度过高，会使克隆株无法筛选出来。
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