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碱裂解法原理

2022.10.10
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超级艾蛋木啊

致力于为分析测试行业奉献终身

碱裂解法是提取质粒的最常用也最有效的方法,是基于染色体DNA与质粒DNA的变性与复性的差异达到分离目的。
原理:高pH使质粒DNA和染色体DNA变性,同时沉淀蛋白质。再将pH值调至中性,质粒DNA较小,很容易复性成双链。而染色体DNA较大,不会复性,缠结成网状不溶物质,从而可以通过离心除去。
方法:依次加入下面三种溶液:
溶液1:
葡萄糖
50
mmol/L,EDTA
100
mmol/L,Tris-Cl
25
mmol/L,溶菌酶5mg/ml,pH
8.0
溶液2:
NaOH
0.2
mol/L,SDS
1%
溶液3:
5
mol/L
KAc
60
ml,冰乙酸
11.5
ml,重蒸水
28.5
ml
其中溶液1作用主要是悬浮菌体,溶液2作用是裂解菌体,释放胞内物质,溶液3是沉淀染色体DNA

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