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物理图的实验技术介绍

2022.10.28
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zhaoqisun

致力于为分析测试行业奉献终身

凝胶电泳

这是分离高分子量DNA的一种电泳技术,使DNA分子处在两个相互垂直、交替更换的电场中移动,把分子量不同的DNA片段分开,可分辨50kb至200kb的DNA分子。

YAC克隆

YAC是由质粒pBR322、酵母的着丝粒、四膜虫rDNA的端粒、酵母的自主复制序列(ARS)以及一些选择标记基因构成。呈环状结构时,可以质粒方式在原核细胞中增殖复制。切成线状结构后,可连同插入的外源DNA,如染色体一样地在酵母细胞中复制、分配给子细胞。YAC作为载体,克隆的外源DNA平均300kb,最长的可达100Okb,稳定地传递给子细胞。设计构建YAC时,在原核生物的复制起点〔Ori)上游安排一个限制酶切位点(如XhoI),当YAC载 有外源DNA后,只需用Xhol酶切,则靠近克隆位点的外源DNA上的XhoI切点,可与YAC的XhoI切点互补结合呈环状,按质粒进行复制和被回收。这种技术称为质粒获救。用这种方法可把外源DNA的末端分离出来,作为钓取与其邻接的、具有共同末端序列亦即重叠序列的另一DNA片段的探针。实际上这也就是染色体步移的操作。

PCR

PCR(多聚酶链反应)体外扩增DNA的技术,在生物学、医学等基础研究和临床诊断上有极其广泛的用途。在构建基因组物理图时,主要用于验证STS。

原位杂交

传统的以同位素标记探针作原位杂交,曝光后的颗粒较粗,定位不易精确。正在研究以荧光染料代替同位素,提高定位的精确度。

细胞分析

这是利用体细胞遗传学的方法构建高分辨的染色体图的技术。人-鼠杂种细胞接受射线辐照后,染色体断裂,筛选出保留缺失程度不同的人染色体的杂种细胞,可用于构建大尺度染色体物理图。


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