照高效液相色谱法(通则0512)测定。固相萃取柱的前处理、系统适用性试验与要求取固相萃取柱1支(用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂),依次用甲醇水(3:1)15ml与水5ml冲洗,再用pH值约为9的氨水溶液(取水适量,滴加氨试液至pH值为9)冲洗至流出液pH值约为9,待用。精密量取每1ml中约含吗啡对照品0.5mg的5%醋酸溶液0.5ml,置处理后的固相萃取柱上,以供试品溶液中相同的洗脱条件洗脱,用5ml量瓶收集洗脱液至刻度,摇匀,作为固相萃取柱系统适用性溶液。精密量取该溶液与对照品溶液各10l,分别注入液相色谱仪,记录色谱图。固相萃取柱系统适用性试验结果(fs)按下列公式计算,应在0.97~1.03之间系统适用性试验结果()=AB/C式中Ax为系统适用性溶液吗啡峰面积;AR为对照品溶液吗啡峰面积;Cx为系统适用性溶液浓度CR为对照品溶液浓度供试品溶液取本品约10g,研细(过五号筛),取约1g,精密称定,置200ml量瓶中,加5%醋酸溶液适量,超声30分钟使吗啡溶解,取出,放冷,用5%醋酸溶液稀释至刻度,摇匀,滤过,精密量取续滤液0.5ml,置处理后的固相萃取柱上,滴加氨试液适量使柱内溶液的pH值约为9(上样前,另取同体积的续滤液预先调试,以确定滴加氨试液的量),摇匀,待溶剂滴尽后,用水20ml冲洗,以含10%甲醇的5%醋酸溶液洗脱,用5ml量瓶收集洗脱液至刻度,摇匀。对照品溶液取吗啡对照品适量,精密称定,加含10%甲醇的5%醋酸溶液溶解并定量稀释制成每1ml中约含50μg的溶液。色谱条件用辛基硅烷键合硅胶为填充剂;以50mmo/L磷酸二氢钾溶液-2.5 mmol/L庚烷磺酸钠溶液乙腈(5:5:2)为流动相;检测波长为220nm;进样体积10l。系统适用性要求理论板数按吗啡峰计算不低于1000测定法精密量取供试品溶液与对照品溶液,分别注入液相色谱仪,记录色谱图,按外标法以峰面积计算。
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