有关物质照高效液相色谱法(通则0512)则定。溶剂流动相A-流动相B(92:8)。供试品溶液临用新制。取本品适量,加溶剂溶解并稀释制成每1ml中约含0.5mg的溶液。对照溶液精密量取供试品溶液适量,用溶剂定量稀释制成每1ml中约含0.5g的溶液。系统适用性溶液取去羟肌苷杂质混合对照品适量,加溶剂溶解并稀释制成每1ml中约含0.5mg的溶液。色谱条件用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(4.6m250mm,5μm);以醋酸铵溶液(取醋酸铵3.86g,加水800ml溶用氨溶液调节pH值至8.0,加水至1000ml)为流动相A,以乙腈-甲醇(50:50)为流动相B,按下表进行梯度洗脱;检测被长为254nm;进样体积20pl时间(分钟)流动相A(%)流动相B(%)系统适用性要求系统适用性溶液色谱图中,调节流动相比例使去羟肌苷峰的保留时间为12~15分钟,2′-去氧肌苷峰与3′去氧肌苷峰间的分离度应符合要求;对照溶液色谱图中,主成分色谱峰峰高的信噪比应大于20测定法精密量取供试品溶液与对照溶液,分别注入液相色谱仪,记录色谱图。限度供试品溶液色谱图中如有杂质峰,照下表中的相对保留时间定位各杂质。次黄嘌呤的峰面积与其相对校正因子(0.62)的乘积不得过对照溶液主峰面积的5倍(0.5%),,3′-脱水肌苷的峰面积不得过对照溶液主峰面积的2倍(0.2%),其他单个杂质的峰面积不得过对照溶液的主峰面积0.1%),杂质总量不得过1.0%,小于对照溶液主峰面积0.5倍的峰忽略不计。序号杂质名称相对保留时间次黄嘌呤杂质Ⅱ肌苷0.4杂质Ⅲ2-去氧肌苷0.45杂质Ⅳ3′-去氧肌苷0.5杂质V2,3′-脱水肌苷杂质Ⅵ2,3′-二去氧-2,3′-二去氢肌苷残留溶剂照残留溶剂测定法(通则0861第二法)测定供试品溶液取本品约0.5g,精密称定,置顶空瓶中,精密加入二甲基亚砜5.0ml使溶解,密封。对照品溶液取乙腈、二氯甲烷、乙醇、甲醇、丙酮与异丙醇适量,精密称定,置同一量瓶中,用二甲基亚砜定量稀释制成每1ml中约含乙醇0.5mg、丙酮0.5mg、异丙醇0.5mg、甲醇0.3mg、乙腈0.041mg、二氯甲烷0.06mg的溶液,精密量取5ml,置顶空瓶中,密封,色谱条件以6%氰丙基苯基-94%二甲基聚硅氧烷(或极性相近)为固定液的毛细管柱为色谱柱;起始温度为40℃,维持8分钟,以每分钟40℃的速率升温至200℃,维持10分钟;进样口温度为200℃;检测器温度为250℃;顶空瓶平衡温度为80℃,平衡时间为30分钟。系统适用性要求对照品溶液色谱图中,各成分峰间的分离度均应符合要求测定法取供试品溶液与对照品溶液,分别顶空进样,记录色谱图限度按外标法以峰面积计算,乙腈、二氯甲烷、乙醇、甲醇、丙酮与异丙醇的残留量均应符合规定干燥失重取本品,在105℃干燥至恒重,减失重量不得过0.5%(通则0831)炽灼残渣取本品1.0g,依法检查(通则0841),遗留残渣不得过0.2%。重金属取炽灼残渣项下遗留的残渣,依法检查(通则0821第二法),含重金属不得过百万分之十。
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