基本原理为具有甾体母核结构的化合物,大多可以与有机染料如四氮唑蓝等形成可吸收可见光的稳定的螯合物,在可见光区进行定量检测。该方法在实际工作中已有大量应用,如用异烟肼作为显色剂,在485nm波长定量测定注射液中地塞米松磷酸钠的含量,用氯化三苯四氮唑作为显色剂,在485nm波长定量测定软膏中醋酸泼尼松、醋酸氟氢可的松、醋酸氢化可的松的含量,用四氮唑蓝与醋酸地塞米松形成螯合物,在485nm波长定量测定软膏中醋酸地塞米松的含量,测定滴耳液中氢化可的松的含量。与提取测定法比较,上述方法更为准确、简便。
应用比色法的关键,首先是显色物质的浓度与被测物质的浓度之间必须保持恒定的比例关系；其次,形成的螯合物须稳定；第三,形成的螯合物其摩尔吸收系数(ε)需足够大(ε>10),否则应用价值不大。ε受以下因素影响:溶液体系的pH、染料浓度、用量、反应温度、时间和存在的杂质等。
目前,随着其他分析技术的发展,比色法主要是应用于定性鉴别、纯度检查。
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