鱼类耳石通常有三对,且位置、功能、尺寸、形状和超微结构均不相同。这些不同会影响包括抛光平面和需要制备样品的数量等制样决策。
耳石试样的通用制备程序比较复杂。一般来说,单面制样可以得到足够的生长环分辨率;然而,对于大的耳石来说,更高的分辨率还是得通过双面抛光来实现。制样步骤包括:取样、清洗、干燥,冷镶嵌,低速切割多余树脂,粘接至载玻片,砂纸研磨,机械抛光,清洗检查(完成单面制样),样品和玻片分离,再次粘接(制备样品另一面),重复前述磨光步骤,得到10~50um厚的薄切片,最后抛光。
研磨一般使用CarbiMet系列,从240粒度(P280)开始一直到1200粒度(P2500)。操作过程中要保证载玻片和磨光表面平行,并保持整个平面压力的均匀。当磨光到耳石区域以后,要经常用光学显微镜进行观察。寻找样品核心区域的位置。
注:核心区域是一个被同轴递进高对比度圆环包围的圆形区域,直径通常小于20um。当磨到核心区域时,换用更细的研磨砂纸。