安捷伦多中心切割二维液相— 原理、适用场景、仪器/软件设置（温馨提示：请在 wifi 条件下观看）
2020 版中国药典 0512 高效液相色谱法 — 多维液相色谱
由于拥有极高的峰容量，全二维特别适合从复杂的混合体系中找到一维模式难以发现的的共流出组分，比如天然产物，药物杂质等。其中，中心切割模式由于可以灵活优化正相性选择和分析条件，非常适合将不同分离机理的分析方法合并应用于定性定量分析，比如生物制药中的不同机理的组合（Titer 和 SEC）等。
什么是二维液相？
多维色谱又称为色谱/色谱联用技术，是采用匹配的接口将不同分离性能或特点的色谱链接起来……但实际上，一般只有选用两个合适的色谱柱联用（二维液相）就可以满足对绝大多数难分离混合物样品的分离或富集要求。
引自：2020版中国药典
二维液相有哪些类型？
二维液相色谱可以分为差异显著的两种主要类型：中心切割式二维色谱和全二维色谱：
中心切割式二维色谱，是通过接口将前一级色谱中某一（些）组分传递到后一级色谱中继续分离
全二维色谱是通过接口将前一级色谱中的全部组分连续地传递到后一级色谱中进行分离……
这两种类型下还有若干子类，包括选择性全二维（sLCXLC）和多中心切割 2D-LC（mLC-LC）等。
引自：2020版中国药典
图 1. 多中心切割、选择性全二维、全二维分离示意图
技术核心点“接口”的作用是什么？
接口，是将第一级（第一维）色谱中组分转移至第二级（第二维）色谱的切换阀组件。它充当第一维的收集器和第二维的进样器的角色。二维分离之间的接口是系统的核心，因为这部分硬件的选择和性能直接影响着第一维和第二维分离的很多方面，以及系统的总体性能。
图 2. “接口”作用示意图
安捷伦专利设计的双 2 位 /4 通阀，作为推荐的稳定接口，适用于单/多中心切割、全二维、选择性全二维等全部二维分离模式。
图 3. （左）多中心切割二维、选择性全二维接口示意图；（右）全二维接口示意图
稳定的接口需要具备哪些特点？
小的切阀压力波动/长寿命
“全二维”分离中，阀上的两个 loop 交替的进行第一维组分的收集和组分在第二维的进样。阀需要在高压条件下进行几十次或几百次快速精准地切换。对阀的寿命、切阀的压力波动都有非常高的要求。
流路的对称性
在复杂 LCxLC 色谱图中进行峰鉴别和归属时，第二维保留时间和峰形的一致性非常重要。
流路不对称会出现如下图左边二维谱图所示的波动性（ 2 位 /10 通阀由于桥连管线的存在无法实现流路对称）。安捷伦双 2 位 /4 通阀，采用完全对称的流路设计，确保了第二维保留时间和峰形的完全一致。
图 4. Agilent 双 2 位 /4 通阀接口全二维的优异稳定表现
改善两维间溶剂兼容性
第一维、第二维分离正交性越高，二维理论峰容量越高；但往往正交性越高的分离模式，会带来溶剂兼容性问题，如：流穿效应、溶剂效应、pH 失配、体积过载效应（峰展宽/变形）、粘度指纹峰（viscous fingering）等
安捷伦主动溶剂调制（ASM）双 2 位 /4 通阀，可以克服这些效应，改善第二维峰形、分离度和灵敏度。
图 5. Agilent 主动溶剂调制（ASM）双 2 位 /4 通阀
图 6. 第一维 HILIC、第二维反相色谱，使用主动溶剂调制阀消除溶剂效应
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《二维液相色谱原理、实施与应用——基础导论》
《带主动溶剂调制功能的 Agilent InfinityLab 二维液相色谱解决方案》
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