论文分享丨免疫亲和柱全自动固相萃取－高效液相色谱法测定粮油中玉米赤霉烯酮

睿科集团

2022.12.23

作者睿科集团

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玉米赤霉烯酮是由镰刀菌产生的具有类雌激素作用的一类真菌毒素，广泛存在于玉米、小麦、高粱等粮谷类作物中。误食玉米赤霉烯酮会产生急慢性中毒，如动物雌激素水平提高，动物流产、死胎、畸形等生殖异常，还具有肝毒性、免疫毒性及细胞毒性等。玉米赤霉烯酮的污染受到世界各国的重视，GB /T 2761—2017《食品安全国家标准食品中真菌毒素限量》规定了玉米、小麦中玉米赤霉烯酮最高限量为 60 μg /kg。

目前，国内外检测玉米赤霉烯酮的方法主要有薄层色谱法、免疫亲和层析荧光光度法、酶联免疫吸附法、免疫胶体金快速测定法、气相色谱－质谱联用法、高效液相色谱法、液相色谱质谱联用法等。薄层色谱法检测步骤烦琐，重现性差，灵敏度低。免疫亲和层析荧光光度法、酶联免疫吸附法、胶体金试纸条法属于快检方法，适用于粮库、企业等收粮过程的简单筛查。高效液相色谱法、液相色谱质谱联用法适用于实验室内精确定量。但现有普遍使用的免疫亲和柱层析高效液相色谱法存在前处理复杂、耗时长，人为因素引入误差和错误的风险高，对人员技术水平要求高，人员暴露在真菌毒素和试剂污染环境中时间长的问题。

为解决这一问题，粮油质量安全研究所、国家粮食与物资储备局科学研究院、睿科集团及河南工业大学信息科学与工程学院有关研究人员提出了《免疫亲和柱全自动固相萃取- 高效液相色谱法测定粮油中玉米赤霉烯酮》并将相关研究成果发布在中国粮油学报。

本研究将针对免疫亲和柱层析高效液相色谱法检测真菌毒素存在的弊端，建立了免疫亲和柱全自动固相萃取高效液相色谱法测定粮油中的玉米赤霉烯酮的方法。样品经90%乙腈水提取离心，1: 4 稀释离心或过滤，采用全自动固相萃取进行免疫亲和柱净化，洗脱液 55 ℃ 氮气吹干，1mL初始流动相复溶上机检测。结果表明: 本方法测定粮油中玉米赤霉烯酮的检出限为7μg /kg，定量限为20μg/kg，相关系数＞0. 999，加标回收率为99. 0% ～ 110.4% ，日内相对标准偏差为1. 5%～2. 1%( n= 6) ，日间精密度为 6.1% (n=18)，测定三种基体质控物质的结果均在标示值范围内，且无显著台间差，无仪器残留。本方法同时处理6份样品的前处理时间为35min，可批量自动化处理样品提高工作效率，避免因人员操作导致的结果偏差，可用于大量粮油样品中玉米赤霉烯酮的精准测定。

此次实验样品前处理过程采用睿科全自动固相萃取仪、睿科氮吹浓缩仪。