【酶标仪应用】核酸及蛋白质检测方法总述-2

美谷分子仪器

2015.12.18

作者美谷分子仪器

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专利的光径自动校正技术可将检测OD值校正至标准1 cm比色皿光径的读值
紫外-可见分光光度计和酶标仪的本质区别在于它们的光束通过光径的长度。对于分光光度计而言，样本装在比色皿或试管中，通过水平（交叉部分）光路进行检测。基于相同物质具有相同的摩尔消光系数特点以及相同水平的光束及标准1cm的光程路径，实验结果可以直接测定，方便不同实验室之间的将获得的数据进行比较。而在酶标仪中，垂直光程路径的长度取决于每个孔中的液体的体积。由于酶标仪各孔中的光径长度不同，无法利用基于相同摩尔消光系数的定律在酶标仪和分光光度计上获得一致的检测结果。不过借助于SpectraMax酶标仪具有专利的PathCheck技术就可以弥补此缺陷，进行数据比较。其优势在于可以将微孔板中每个孔检测的光吸收值自动校准为标准1cm光径的光吸收值。这篇应用手册讨论了PathCheck的原理，并给出了如何在SpectraMax酶标仪和Softmax Pro软件上进行相应检测。

使用NanoOrange荧光法测定蛋白质含量
传统蛋白质定量采用光吸收法，例如在280nm处检测其吸光值，BCA，Bradford或Lowry等方法，在微孔板中的检测灵敏度都不是很高。Life Technologies公司推出的NanoOrange蛋白定量试剂盒在微孔板中的动态范围从10 ng/mL到10 μg/mL。这篇应用中获得的数据可以了解到其具有更宽动态范围和最低检测下限。NanoOrange试验，无论其是在Gemini XPS酶标仪上还是在其他SpectraMax荧光酶标仪上通过SoftMax Pro软件运行，它都是一个快速、灵敏的蛋白质定量的方法。SoftMax Pro软件具有强大的数据分析能力，可一键生成需要的结果、用户也可自定义结果导出格式。

使用Bradford和ELISA法测定蛋白质含量
随着许多应用均采用光吸收法进行检测后，具有终点检测法的酶标仪随即在各个实验室中得到广泛的应用。例如，使用ELISA方法对细胞因子进行定量和使用Bradford方法测定蛋白质浓度。在此，我们借助了经典的Bradford方法来进行蛋白质定量检测，此外，通过ELISA检测法中的夹心法来定量检测样品中mouse/rat IL-22抗体，对EMax Plus 酶标仪与EMax酶标仪进行比较。

使用荧光法对微量DNA样品进行定量检测含量
许多样本进行DNA定量检测均利用紫外光吸收法。然而在许多实验中，由于制备的方法或者样本不足，可能需要对非常少量的样本进行定量检测。荧光定量分析对低浓度的少量样本有更高的敏感度。SpectraMax微孔板酶标仪的SpectraDrop™ 超微量检测板可容纳64个样本，比其他任何微量检测板的通量都高。少至2μL的样本也可以进行分析。SpectraDrop微孔板包含一个特别设计的适配器和光学透明度可以应用在光吸收和荧光两种模式下的石英材质的玻片组合，以满足实验的需求。