哎哟 我的柱子 ——你也在被柱子进气和塌柱困扰吗

1.  仪器流路中的气泡没有被充分排出而进入柱子。

2. 缓冲溶液准备不足而走空，导致空气进入柱子。

3. 连接层析柱时没有做到“液-液”相接。

4. 缓冲溶液没有经过排气，或者由于温度变化或缓冲液入口处滤膜堵塞而产生小气泡，从而进入柱子导致进气。

5. 选择Sample Loop上样时，在把样品推入样品环的过程中，由于操作原因导致样品环中存有气泡，该气泡在上样过程中随之进入柱子。

6. 层析柱长期在室温保存并且没有连接层析柱保护装置。

1. 连接层析柱之前一定要确保流路中的空气都被排出。一般小段气泡选择“Pump Wash”命令就可以排出。如果大段气体进到泵里，往往会出现泵走空的情况，此时就需要进行泵头排气才能解决。

2. 纯化实验前一定要准备充足的缓冲溶液。特别是长时间离开时一定要确认一下缓冲溶液还够不够完成接下来的实验。

3. 接柱时一定要做到“液-液”相接，即接头对接时是在充满液体的情况下以避免进气。

4. 进柱的缓冲溶液需要经过超声或者负压排气。温度变化时需要看一下缓冲液中是否有小气泡产生。缓冲液入口处的滤膜要定期清洗或更换。

5. 选择Sample Loop上样时，如果是采用注射器直接推入样品环的方式，那么推入体积一定要略大于样品环体积，比如选择2mL样品环，那么需要推入比2mL多一点的样品，以把接口处的小气泡推出样品环。

6. 层析柱的保存一般建议低温，如4摄氏度。不仅是为了防止生菌，也为了防止干柱，因为有可能由于柱子没有拧紧或其他原因导致柱子内的溶液蒸发，出现干柱。如果不在低温下保存，最好可以为柱子接上层析柱保护装置，它是一个连接于柱子一端的带弹簧和溶液的小配件，可以持续给柱子提供液体反压，避免进气和干柱。其使用如下图：

1. 当进气不严重时，比如只是进入了小段空气。建议用大量脱气去离子水反向低速冲洗层析柱，直到小气泡被带出。冲洗时建议反压阀（限流器）在线，以增加整个流路中的背压，提高气泡的溶解度。如何确定气泡被充分排出？一般柱子中填料颜色恢复均匀，柱子和管路中无肉眼可见气泡，UV吸收线平稳无毛刺，则一般可认为气泡已排出。

2. 当进气非常严重，比如出现了柱子干裂的情况，可以考虑重新装填层析柱。但是GE预装柱中只有部分是可以重装的，一般塑料外壳的柱子均是不可拆开重装的。

3. 测定柱效或重复之前做过的样品，以判断进气对柱子的影响。如果柱效变化不大或者对于样品分离的效果影响不大，则继续使用，否则建议更换层析柱。柱效测试方法请扫描下方二维码获得。

1. 流速过快，没有设定报警压，从而超压将柱子压塌。

2. 随着层析柱的不断使用，样品会少量残留于层析柱中并不断积累，导致使用时压力较高，或者填料收缩，出现塌柱现象（在填料和柱端之间出现一段空隙）。

1. 任何时候只要柱子已经或即将接入仪器上，必须设定报警压。仔细阅读说明书，会发现压力限一般有三种：系统压、柱前压（Column hardware pressure limit）和压力降（Pressure drop over packed bed）。其具体意义如下图：

因此，如果您的仪器上可以显示”delta Pressure”，那么您可以完全匹配层析柱说明书和对应的上图的压力指示，去设定您的报警压。说明书上的”Column hardware pressure limit” 对应”Pre Column Pressure”；”Pressure drop over packed bed” 对应”delta Pressure”。但是如果您的仪器上没有显示”delta Pressure”，那么您需要”Pressure drop over packed bed” 对应”Pre Column Pressure”。为了保护您的层析柱，最好不要顶着压力限去设定，可以稍微留出一点波动空间。

2.  层析柱需要定期的维护保养，保养方式见网期微信文章，关键词搜索“维护保养”。同时，当使用黏度较高缓冲液或者样品时，注意降低流速。

1. 长时间低流速反向冲洗层析柱，直到胶面恢复，空隙消除。

2. 如果通过反向冲洗的方式最终也无法使胶面恢复，那么需要调节Adaptor下降柱头以消除空隙。

3. 测定柱效或重复之前做过的样品，以判断进气对柱子的影响。如果柱效变化不大或者对于样品分离的效果影响不大，则继续使用，否则建议更换层析柱。柱效测试方法请扫描下方二维码获得。

柱效测定方法看这里～