常见药物中NDMA，NDEA等基因毒性杂质的色谱检测

N-亚硝基二甲胺（NDMA）和N-亚硝基二乙胺（NDEA）等亚硝胺类化合物被世界卫生组织（WHO）旗下的国际癌症研究署（IARC）列为了2A类致癌物。目前已发现它们以杂质形式存在于多种不同的药品中。

NDMA和NDEA等亚硝胺类化合物并不是预期的杂质，而是由于药物生产过程中发生了某些化学反应而被引入到API或者成品药中。美国食品药品监督管理局（USFDA）以及欧洲药品管理局（EMA）已经发布了有关药品中基因毒性杂质的允许限量准则，规定暴露于基因毒性杂质的暴露量需低于每天1.5μg的毒理学关注（TTC）阈值。

由于可能存在NDMA和NDEA杂质污染，2018年7月，美国FDA召回了几款含有缬沙坦的药品。EMA也迅速采取行动，禁止了中国和印度某些制造商的沙坦类药物的进口。随着更多新的研究表明，NDMA及NDEA等亚硝胺类基因毒素不仅存在于缬沙坦，氯沙坦等沙坦类药物中，雷尼替丁甚至盐酸吡格列酮中也被发现有亚硝胺类物质的踪迹。2020年4月1日，美国FDA更是要求生产商从市场上撤回所有处方及非处方的雷尼替丁药品。

由于亚硝胺类物质的高极性以及低分子量等特性，寻找一种既稳定，又有高灵敏度的方法就显得尤为重要。目前对于此类物质的分析方法主要有GC-MS/MS和HPLC-MS/MS两种。

艾杰尔-飞诺美开发出一个使用ZB-624PLUS气相色谱柱来检测沙坦类药物中NDMA和NDEA含量的方法1。其中对于NDMA的检测灵敏度（LOQ）可以达到1.5 ppb，对于NDEA可达到0.9 ppb。

该方法还选取了两款不同生产批次的缬沙坦药物片剂，采取顶空进样方式进行分析。由于ZB-624PLUS增强了聚硅氧烷主链的交联，从而使其可以在比传统G43固定相更高的温度下使用，并且不必担心色谱柱固定相流失。这些都为ppb级别的检测提供了可能。

色谱柱运行条件：

色谱柱：Zebron ZB-624plus

规格：30mx0.25mmx1.40μm

产品货号：7HG-G040-27

进样：分流 10:1,150℃

顶空进样 1 mL样品于20 mL样品瓶中

载气：氦气,36.1 cm/sec

柱温箱程序：

60 ℃保持 1分钟，之后以20℃/min的速度升至 240℃并保持1分钟

检测器：MSD,250 ℃

样品：

1. NDMA  2. NDEA

（注：具体顶空进样条件及质谱检测条件见技术笔记TN-2080）

由于灵敏度的限制，UV-Vis检测器在原料药，制剂，甚至饮用水中亚硝胺类化合物的检测中并不常见。美国FDA发布了一种使用Kinetex^® 2.6μm F5色谱柱对血管紧张素II受体阻滞剂（ARB）类药物中六种亚硝胺类杂质在液相色谱-高分辨率质谱（HPLC-HRMS）下的检测2。其检测限如下表所示：

在美国FDA发布的该方法中，Kinetex 2.6 μm F5 100 Å, 100 x 4.6 mm（产品货号：00D-4723-E0) 的色谱柱在含0.1%甲酸的水溶液和含0.1%甲酸的甲醇溶液体系下进行了梯度淋洗。由于五氟苯基（PFP）基团可以提供包括疏水性作用，π- π相互作用，偶极矩作用，以及氢键等不同的相互作用，其对于极性较大的亚硝胺类杂质可以提供较好的保留以及分离度。SCIEX也开发出一款使用Kinetex 2.6μm F5色谱柱检测八种不同亚硝胺类化合物的方法3，其定量下限（LLOQ）可达到0.05 μg/g

色谱柱运行条件：

色谱柱：Kinetex 2.6 μm F5

规格：50 x 2.1 mm

产品货号：00B-4723-AN

流动相：

A：0.1% 甲酸的水溶液

B：0.1%甲酸的甲醇溶液

梯度：见技术笔记TN1259

流速：0.5 mL/min

温度：40 ℃

进样体积：10 μL

检测：SCIEX Triple Quad™ 4500

样品相关质谱数据及保留时间如下表：