摘要
本文建立了苦参中氧化苦参碱和苦参碱的 HPLC 测定方法。结果表明,按照 2020 版《中国药典》中色谱条件,采用色谱柱 Shim-pack GIST C18 分析苦参中氧化苦参碱和苦参碱,氧化苦参碱和苦参碱的峰形对称,理论塔板数大于 4000,且与相邻杂质峰能达到基线分离,满足《中国药典》要求。此方法可为苦参中氧化苦参碱和苦参碱的检测提供参考。
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实验部分
1.1 实验仪器与耗材
Shimadzu LC-20AD 高效液相色谱仪;
色谱柱:Shim-pack GIST C18
(5 μm,4.6×250 mm;P/N:227-30017-08;S/N:19G04828);
SHIMSEN Disc针式过滤器(P/N:380-00341);
LC/MS认证样品瓶LabTotal Vial(P/N:227-34001-01);
SHIMSEN Pipet移液枪:SHIMSEN Pipet PMII-100、SHIMSEN Pipet PMII-1000。
1.2 对照品溶液的制备
取苦参碱对照品、氧化苦参碱对照品适量,精密称定,加乙醇分别制成每1mL 含苦参 50 μg、氧化苦参碱 0.15 mg 的溶液,即得。
1.3 供试品溶液的制备
取本品粉末(过三号筛)约 0.3 g,精密称定,置具塞锥形瓶中,加浓氨试液 0.4 mL,精密加入三氯甲烷 25 mL,密塞,称定重量,超声处理(功率 250 W,频率 33 kHz) 40 分钟,放冷,再称定重量,用三氯甲烷补足减失的重量,摇匀,滤过,精密量取续滤液 10 mL,回收溶剂至干,残渣加无水乙醇适量使溶解,转移至 10 mL 量瓶中,加无水乙醇至刻度,摇匀,即得。
1.4分析条件
色谱柱:Shim-pack GIST C18(5 μm,4.6×250 mm;P/N:227-30017-08;S/N:19G04828);
柱温:20℃
检测波长:225 nm
流速:1.0mL/min
进样量:5 µL(对照品溶液)/ 7 µL(供试品溶液)
流动相:
A:0.01 mol/L 乙酸铵溶液(浓氨试液调 pH8.1);
B:乙腈-[0.01 mol/L 乙酸铵溶液(浓氨试液调 pH8.1)](3:2)
梯度程序如下:
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结果及讨论
2.1 色谱图
按照上述色谱条件(1.4)进行采集,对照品溶液和供试品色谱图如下:
对照品溶液:
供试品溶液:
重现性:
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结论
按照 2020 版《中国药典》中色谱条件,建立了苦参中氧化苦参碱和苦参碱的 HPLC 测定方法。结果表明,采用色谱柱 Shim-pack GIST C18 分析氧化苦参碱和苦参碱,氧化苦参碱和苦参碱的理论塔板数大于 4000,且与相邻杂质峰能达到基线分离,满足《中国药典》要求。此方法可为苦参中氧化苦参碱和苦参碱的检测提供参考。