01
问：夏教授好，请问在代谢物筛选方面您有比较好的策略可以分享吗？比如您的两个实验中前列腺素E2和甜菜碱这些代谢物是如何在大量代谢物中被筛选出来，且与生殖毒性密切相关的？谢谢。
答：是采用与生殖毒性有关的病例对照研究设计，通过较大样本人群生物样本的代谢组，对差异代谢物进行分析，按一定标准筛选关键差异代谢物。是常用设计。
02
问：夏老师您好，请问你们实验室做代谢组学是有建自己的标准品库吗？一般做non-targeted profiling analysis是哪些检测手段呢？
答：是的。我们有自己的库。传统non-target先采用代谢物全谱扫描，然后用统计分析筛选差异信号，最后用公共数据库比对进行可能的代谢物鉴定。要求更高的可以采用标准品进行进一步鉴定。
03
问：怎么通过已知的二级谱图来推算类似的代谢物呢？这样鉴定出来的代谢物是只能确定结构吗？还是能够鉴定这个物质到底是什么？
答：如果老师手上有自己打出来的谱图，可以去类似PUBCHEM之类的公共数据库检索搜库，如果仅想通过二级谱图去鉴定物质通常难度会较大。
04
问：请问非靶差异代谢物用二级图谱比对后，还需要做进一步验证吗？比如买标准品、靶向验证这些？CCS是不是在鉴定未知代谢物的意义更大呢？
答：非靶之后最好还是要做一下标准品的靶向验证的，非靶存在一定的假阳性。CCS对于鉴定已知代谢物也可以提高鉴定的准确性。
05
问：朱老师，您提到人类有10万个代谢产物/小分子，这个数目，是包括各种细菌分泌的吗？还是我们人体细胞endogenous 的metablite 就有十万个？如果分开，体内细胞自己合成有多少个，或者单个细胞你感觉有多少个？
答：10万个数目来自HMDB（human metabolome database）收录的小分子代谢物数目，是指在跟人相关的生物样本中（比如血液、尿液、粪便、人体细胞、人组织等）检测到并文献报道过的小分子代谢物。
体内细胞合成的代谢物没法估计，目前以KEGG为例，大致在数千个到1万种左右，但是肯定存在大量未知代谢物。
单细胞目前大致能检测的代谢物约为几十个到上百个代谢物。但是实际数目肯定远远超过能检测到的。
06
问：唾液等体液可以做代谢组学么？
答：可以做，我们目前就有唾液样本的代谢组学项目在跟进，我们也有成熟的唾液样本收集方法，可以联系BIOTREE当地对应销售工程师。
07
问：请问吴总在数据处理的矫正分析中，LOESS和SVR算法那一种算法效果更好，国内外对于这两个算法的公认性如何，谢谢！
答：从SVR文章中给出的数据上来看，SVR优于LOESS。但是LOESS是一个很经典的算法，新出的算法都要和它对比一下才行。可以说LOESS是公认性最高的算法，但是不一定是最优秀的，因为新算法推出来需要时间检验，如果全面优于LOESS，那么就会取代掉LOESS成为新一代的经典。
08
问：请问同一个体的不同样本（比如同一个人的血、尿、便等）的研究如何质控呢？这种多样本的数据如何进行分析解读呢？是进行不同样本间数据的关联性分析吗？谢谢。
答：每一种样本单独做质控。数据分析方法很多，关联分析挺经典的。也可以单独分析后找到差异代谢物，看看这些物质在不同样本之间有什么联系，等等。
09
问：同位素内标正负离子模式各8个去监控成百上千个不同浓度离子特征，是否会过少？
答：理论上讲，每个物质都需要其对应的稳定同位素内标进行质控，但是这并不现实，因为很多feature根本无法知道是什么物质，知道了是什么物质也不一定买的到标品，买的到标品也不一定买得到稳定同位素标品，买的到稳定同位素标品的话也不一定买的起，买的起也用不起......所以有选择性地（比如在前中后保留时间上都要有内标出峰）选取少数几个物质来进行质控，排除掉“一部分”问题就足够了。不能奢望一条标准搞定所有，所以我们质控体系除了稳定同位素内标之外还有QC样本进行质控等其他手段。不同的手段质控的范围、时间段、角度都是不同的，从而避免掉绝大部分错误。
010
问：您好，想请问下，如果要做代谢组学，在前期收集样本时，如人的尿液或者血液等，是根据不同的研究目的有不同的收集时的注意事项，还是只要是做代谢组学，样本的收集都一样，样本收集时有什么要求嘛，比如量、是否加入其它试剂、温度等。
答：绝大部分情况下，代谢组学样本收集只需要注意“淬灭”、“避免反复冻融”就足够了。如果待研究的代谢物比较特殊，比如见光易分解，需要针对性地做特殊处理。样本收集的量、温度，取决于研究目的，欢迎咨询当地BIOTREE的销售工程师，可以免费提供详细收样方法的资料和咨询服务。
011
问：请问如果针对大队列，若有针对特殊样本建库需求，这个建库的样本量多少为宜？
答：不明白“建库”是一项什么样的工作，如果只是拿很多人份的样本pool在一起的话，个人认为至少200人份，推荐500人份以上，否则代表性不强。如果问库的体积，这个取决于待检测样本数量。
012
问：在PPT开端，姚老师有提到到这个慢性疲劳综合征，不过后面是对二至丸成分效用的分析，不知道姚老师课题组是否有对这个CFS疾病的诊断和机理方面有后续研究方向和结果呢？
答：慢性疲劳综合征只是为了引出亚健康，二至丸在治疗这些亚健康症状上有一定作用，跟疾病诊断没有关系。
013
问：老师您好，多组方的复方制剂研究，应用血清药理去解释的话，您是有什么好的想法以及展望。毕竟多组方的研究，过多的干扰因素以及考虑的多。
答：利用含药血清给细胞上药，就是为了减少直接中药提取物给药对细胞造成的伤害，恰恰是为了减少干扰。要说明的一点是，这里我们并没有用血清药理研究手段，而只是用了含药血清代替原来的直接给药，含药血清虽然现在争论仍然很多，但是也是目前可以折中的一种方式，可以被大多数学者接受，当然最好是单体给药了，但是又有一个新问题，就没有了中药多成分之实了。
014
问：超灵敏的代谢组方法一针最多检测多少代谢物？
答：我司项目经验，通常LC-MS血浆类样本正负离子在一起大约能定性出来500-800二级定性物质。
15
问：请问段教授癌症在中医角度属于什么症候？
答：这是个很大的复杂问题。简单的说，癌症在中医角度，可能涵盖在不同的证候中。中医对癌症的认识相当早，有诸多证候都与癌症（最早称之为岩）有关联。请注意，证候不是症候。
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