氨基酸及其类似物广泛参与体内病理和生理过程,因此具有重要的临床意义,其体内分析在生物医学研究中有广泛的应用。体内基质干扰较严重,对灵敏度和重现性具有更高的要求。
为此,我们专门推出了Kairos试剂盒。它采用经典的AccQ·Tag衍生方法,可在10分钟内完成样品分析,结合质谱检测器,提高了检测灵敏度,LOQ在5 μM以上(文末分享应用1)。其中的系列标准品,有效排除基质干扰,确保了数据的可靠性(文末分享应用2)。
01试剂
Kairos采用AccQ·Tag相同的衍生方式,能与伯/仲胺发生反应。与常规氨基酸衍生试剂盒不同,Kairos中衍生试剂的量更高,是常规试剂盒的3倍,保证了体内氨基酸能完全反应。
图1. AccQ·Tag衍生示意图
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专业氨基酸定量标准品
Kairos有三套标准品。核心标准品包含45种氨基酸,这些标准品均经过精密的称重配制,其中有9个标准品来自日本计量标准综合研究所(NMIJ),8个标准品来自美国标准物质国家研究院(NIST)。标准品分为7个不同的包装,分别对应不同的浓度,可以直接在5-4000 μM范围内建立标准曲线,进行体内氨基酸的定量检测。
图2. 核心标准品
其中的QC标准品,包含同样的45个氨基酸,有两个不同的包装,对应两种不同的浓度,经过上述核心标准品的定量检测后,可以监控分析方法的准确性。
图3. QC标准品
与上述两种标准品不同,氨基酸内标,只包含20个氨基酸。这些标准品都采用同位素标记,因此能有效消除基质的干扰,从而提高了检测数据的准确性。
图4. 同位素标记标准品
各同位素氨基酸推荐SIR检测值如下:
图5. Kairos内标质谱数据
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应用案例分享
法布里病是由α-半乳糖苷酶A(α-Gal A)活性缺失导致,鞘氨醇三聚己糖苷(lyso-Gb3)可能是其生物标志物。但通过Kairos衍生及LCMS检测,对病人的临床检测研究发现,鞘氨醇三聚己糖苷(lyso-Gb3)在这一疾病进展或过程中并没有明显的相关性,临床诊断需要同时参考生化和临床证据。详情请参考文末更多应用分享3。
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