英国国家生物标准与控制研究所（NIBSC）和中国国家食品药品监督管理局（NIFDC）在Journalof Pharmaceutical and Biomedical Analysis发表文章：Comprehensiveglycan analysis of twelve recombinant human erythropoietin preparations from manufacturersin China and Japan。完成12家中国和日本药企生产的rhEPO完整糖基化分析研究。
原文研究摘要
重组人促红细胞生成素（recombinant human erythropoietin，rhEPO）是一种糖蛋白激素，临床上用于治疗慢性肾病或化疗引起的贫血症。现在全球有许多rhEPO的生物仿制药陆续上市。基于rhEPO有着非常复杂的糖基化图谱，而这些糖基化修饰对其生物活性有着至关重要的影响，所以需密切监测rhEPO研发与质控，以确保其与原研药的一致性，安全性和有效性。在这篇文章中，我们对来自11家中国和1家日本药企生产的rhEPO制剂进行了比较：体内生物活性的检测以及通过唾液酸含量的测定，CE方法（iCIEF/iCE3)检测电荷异构体分布，AEX/HILICMS方法检测O-糖谱图和N-糖谱图来探讨rhEPO生物活性与其糖基化的关系。我们观察到这12种rhEPO的糖基化图谱中出现唾液酸O-乙酰化，N-糖上N-聚乙酰乳糖胺单元的延伸，以及多天线结构中唾液酸的分布等差异。一些样品中N-糖上出现疑似5-和6-阴离子水平的升高与rhEPO的异构体的酸性升高一致，这也可以通过体内生物学活性的略微升高来反映。除此之外，这些糖基化图谱的差异并没有对小鼠体内的生物学活性产生影响。尽管如此，随着生物仿制药的不断出现，该研究强调了监测生物制剂糖基化的重要性，从而对产品之间的差异性和异常糖基化的出现做出合理解释。
研究结果
N-glycanresolution and identification via AEX/HILIC-MS
Sialic acidcontent and distribution
O-acetylatedand N-acetyllactosamineextended N-glycans
Trends inglycosylation and biological activity
本研究所用CE技术：
Capillaryelectrophoresis (CE)
Amaster mix (MM) was prepared fresh daily containing 4M urea, 0.35%methylcellulose and 4% Pharmalytes mixture (Pharmalytes 3–10: Pharmalytes2.5-5, 1:3). rhEPO samples were preparedusing 100μl of MM with 0.5 μl each of pImarkers 3.59 and 5.85, at a target concentration of 0.2 mg/ml. Samples werevortexed briefly to ensure complete mixing and centrifuged at 10,000 rpm for 3min to remove air bubbles. CE was performed using an iCE3 whole-capillary system, an FC-coated column cartridge, and pImarkers 3.59 and 5.85 (ProteinSimple,CA, USA). The anolyte and catholyte solutions were 80 mM phosphoric acidand 100 mM sodium hydroxide respectively. Samples were focused for 1 min at 1.5kV, followed by 6.5 min at 3 kV, and A280 images of the capillary were takenusing iCE analysis software.
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