前言
随着我国中医药产业的快速发展，中药材与饮片使用人群范围日益扩大，市场需求不断增长。由于产地分布广、加工企业多、制备工艺各异及成分复杂多变等，给中药材与饮片的质量控制带来极大的挑战，保障中药材与饮片安全性显得尤为重要。因此，中药材与饮片微生物污染问题不容忽视，特别是在生产以及加工储运过程中，如不采取有效措施加以控制，极易造成外源微生物的污染，其中可能产生大量致病菌和某些真菌毒素，导致中药材与饮片存在一定的安全性风险隐患，给临床使用带来安全性问题。
黄曲霉毒素具有很强的肝毒性和致癌性，可致人死亡。中药材在其种植、采收、运输和贮藏过程中，每个环节都可能因为操作方法不当而被黄曲霉毒素污染，从而导致大量黄曲霉毒素的生长和积累，这将直接影响中药的质量与疗效，极大地危害着人们的身体健康，并且使中药的质量与使用安全得到了限制。
本文参考2020版《中国药典》2351 通则中的黄曲霉毒素测定法，使用莱伯泰科SPE1000全自动固相萃取系统对常用中药（人参、枸杞、大枣）的黄曲霉毒素进行固相萃取，采用LC-MS检测，建立了一套中药的黄曲霉毒素处理检测方法，采用免疫亲和柱柱净化样品，此方法回收率及平行性良好，各成分加标回收率为65.0%~103.3%，重复性RSD为1.2%~4.3 %，满足检测要求。
关键词：SPE1000 2020版《中国药典》 黄曲霉毒素 2351通则 MiniLab3000
一、仪器设备及试剂
SPE1000全自动固相萃取系统（莱伯泰科公司）；
SCIEX Exion LC™液相系统+ Triple Quad™ 4500质谱系统（SCIEX中国公司）；
MiniLab3000全自动液体样品处理平台（莱伯泰科公司）；
甲醇（色谱级）；
蒸馏水；
黄曲霉毒素免疫亲和柱（3mL，Romer）；
黄曲霉毒素混标溶液（购自坛墨质检）；
氯化钠；
PBS缓冲液（8g NaCl、0.2g KCl、1.44g Na2HPO4和0.24g KH2PO4,溶于800ml蒸馏水中，用HCl调节溶液的pH值至7.4后，稀释至1000mL）；
二、试验方法
分别取人参、枸杞、大枣三种中药进行实验，精密称取各中药样品粉末15g，加入氯化钠3g，精密加入70%甲醇溶液75mL，均质2min（11000r/min），离心5min（每分钟4000转），取上清液15mL，用水稀释至50mL，离心10min（每分钟4000转）混匀，取上清液20mL作为后续实验样品。
将2.1的20mL样品放入SPE1000全自动固相萃取系统，按照图1所示的方法进行样品的净化步骤，收集净化液，用0.22μm滤膜过滤，待后续处理。
图1 黄曲霉毒素净化流程
标准曲线配制：取混标母液至MiniLab3000全自动液体样品处理平台上，按图2方法配制标曲，最终各成分浓度如表1。
图2 MiniLab3000全自动液体样品处理平台黄曲霉毒素标曲配制流程
表1 混合对照品浓度表
按2.1方法准备样品，进行加标实验，按药典所规定的检出限黄曲霉毒素B1、G1 0.5μg/kg，黄曲霉毒素B2、G2 0.2μg/kg进行加标，然后按照2.2方法进行前处理实验，同时进行3个平行样品，用来测定加标回收率及平行性。
色谱柱：Shim-pack Velox C18（2.7μm，2.1*100mm）；
流动相：A: 10mmol/L乙酸铵溶液；B:甲醇；
流速：0.3 mL/ min；柱温：25℃；进样量：5 μL；
洗脱梯度：0min，35%B；4.5min，85%B；6min，100%B；6.5min，35%B；10min，35%B；
2、质谱条件
离子源：ESI源，MRM模式，正离子模式；
离子源参数：
IS电压：5500V 气帘气CUR:35 psi；雾化气GS1:50 psi 辅助气GS2:65 psi；
源温度TEM:650 ℃ 碰撞气CAD: 8 psi；
三、结果与讨论
图3 标准工作液LC-MS MRM总离子流色谱图（正离子模式）
图4 基质加标LC-MS MRM总离子流色谱图（正离子模式）
图5 多黄曲霉毒素菌毒素LC-MS法标准曲线
加标样品经免疫亲和柱净化后，分别进行LC-MS分析、定量，计算得到的加标回收率及相对标准偏差如表3所示。
表3多种真菌毒素LC-MS法加标回收率
四、结论
由表3可知，2020版《中国药典》2351通则中黄曲霉毒素测定法的加标回收率为65.0%~103.3%，重复性RSD为1.2%~4.3 %，满足检测要求。
综上所述，莱伯泰科SPE1000全自动固相萃取系统及MiniLab3000全自动液体样品处理平台能够高效、稳定地达到实验的要求，适用于2020版《中国药典》2351通则中规定的黄曲霉毒素测定，适用于人参、大枣、枸杞等多种中药样品的前处理实验。
参考文献：
[1] 张晓萍,刘笑笑,苗菊.中药中黄曲霉毒素的研究进展[J].甘肃科技,2021,37(05):73-77.
[2] 柯颖,徐昕怡,洪小栩.ELISA法检测中药材及中药饮片真菌毒素的探讨[J].中国合理用药探索,2020,17(04):17-21.
关于莱伯泰科
北京莱伯泰科仪器股份有限公司（股票代码：688056.SH）成立于2002年，是一家专业从事实验分析仪器的研发、生产和销售的科技型公司。公司自成立之初便专注于科学仪器设备的研发，立志为环境检测、食品安全、医疗卫生、疾病控制、材料研究等众多基础科学及行业应用提供实用可靠的实验室设备和整体解决方案。公司发展至今已拥有各类专利及软件著作权100余项，持续通过高新技术企业认证，连续多年被业内媒体评为中国仪器仪表行业“最具影响力企业”，是全球范围内能将多种类和多功能的样品前处理技术与全自动实验分析检测平台组合成全自动实验分析仪器系统的主要实验分析仪器供应商之一。
公司拥有LabTech、CDS、Empore等行业知名品牌，在中国和美国设有研发和生产基地，并在中国内地主要城市、中国香港、美国马萨诸塞州和宾夕法尼亚州等地设有产品营销和服务中心。公司产品服务涵盖实验室分析仪器、样品前处理仪器、实验室设备、医疗设备、实验室耗材和实验室工程建设等，可为全球多种类型用户提供从实验室建设到样品分析的一站式解决方案。目前，公司产品已销往全球90多个国家和地区，累计服务客户3万余家。
如需了解莱伯泰科的详细信息，请访问http://www.labtechgroup.com/。
扫描二维码关注我们
首页
