尼卡巴嗪的危害及检测目的
尼卡巴嗪（Nicarbazin）又名球虫净，1955年由美国Merck公司开发，具有高效、广谱抗球虫活性，预防效果很好，且耐药性发展极慢，至今仍然是最有效的抗球虫药之一。尼卡巴嗪是4,4’-二硝基均二苯脲（DNC）与2-羟基-4,6-二甲基嘧啶（HDP）的复合物。HDP在动物体内由尿液排出，代谢迅速。而DNC通过粪便排出，代谢缓慢，因而在肌肉及其他组织中会出现不同程度的残留，人们食用后会产生潜在危害。联合国粮农组织以及新西兰、日本和我国等均以DNC单体作为尼卡巴嗪的残留标志物。为规范尼卡巴嗪在养殖鸡群中的用药，2020年我国生效实施的GB 31650-2019《食品安全国家标准 食品中兽药最大残留限量》中规定了DNC在肉鸡不同组织中的最大残留限量。
本文阐述了如何将4,4’-二硝基均二苯脲（DNC）从样品基质中分离提取出来，并经过净化后，转化成液质联用仪可以检测的形式。以提取、净化为重点，依据国标GB 29690-2013，为检测人员和相关领域研究人员提供一定的参考。
检测项目：4,4’-二硝基均二苯脲（DNC）
应用范围：鸡肌肉/鸡蛋
前处理仪器：
分析天平（感量0.00001 g和0.01 g）；涡旋振荡器；离心机；氮吹仪；离心管（50 mL）；滤膜（0.2 μm）。
检测仪器：LC-MS/MS+ESI源
试样制备与保存
1.鸡蛋
取适量新鲜或冷藏的空白或供试鸡蛋，去壳，并使均质。零下20 ℃以下保存。
取均质后的供试样品，作为供试试料；
取均质后的空白样品，作为空白试料；
取均质后的空白样品，添加适宜浓度的标准工作液，作为空白添加试料。
2.鸡肌肉
取适量新鲜或冷冻的空白或供试组织，绞碎，并使均质。零下20 ℃以下保存。
取均质后的供试样品，作为供试试料；
取均质后的空白样品，作为空白试料；
取均质后的空白样品，添加适宜浓度的标准工作液，作为空白添加试料。
前处理方法
提取与净化
称取试料2 g±0.02 g，于50 mL离心管中，添加10 μg/mL 4,4’-二硝基均二苯脲-D8标准工作液适量，加无水硫酸钠2 g，乙腈8 mL，涡旋0.5 min，超声5 min，5000 r/min离心10 min，取上清液，于40 ℃氮气吹干，加75 %甲醇水溶液饱和的正己烷1 mL，涡旋10 s，再加75 %甲醇水溶液1.0 mL，充分涡旋混合，于40 ℃水浴中静置5 min，2000 r/min离心5 min，取下层清液，滤膜过滤，供液相色谱-串联质谱测定。
国标解读及注意事项
1.DNC标准物质用二甲基甲酰胺配成1 mg/mL的标准储备液，在2 ℃-8 ℃保存，可使用3个月；DNC-D8标准物质用二甲基甲酰胺配成1 mg/mL的标准储备液，在2 ℃-8 ℃保存，可使用3个月。
5.同位素内标加入量决定最终定容后的理论上机浓度，务必与配制的标准曲线中各点同位素的浓度相一致，才能正确校正回收率。
6.液质联用仪负离子扫描检测，为保证检测灵敏度，建议正负离子扫描分开仪器进行。
参考文献
GB 29690-2013 食品安全国家标准 动物性食品中尼卡巴嗪残留标志物残留量的测定 液相色谱-串联质谱法
图1 鸡肌肉和鸡蛋中DNC残留量测定的前处理流程图
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